[发明专利]一种用于不同亚型非小细胞肺癌分型的核酸适体及其筛选方法

说明书

本申请是申请号为200910083075.X、申请日为2009年04月28日、发明创造名称为“用于不同亚型非小细胞肺癌分型的核酸适体及其筛选方法”的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种用于不同亚型非小细胞肺癌分型的核酸适体及其筛选方法。

背景技术

肺癌是最致命的癌症之一，在组织学上分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌，其中后者占肺癌病例的80％。非小细胞肺癌又分为腺癌，鳞癌和大细胞癌三类亚型。腺癌作为一种最主要的亚型，占非小细胞肺癌的40％。非小细胞肺癌的预后严重依赖于确诊时疾病所处的分期，按照现有的治疗水平，病人的5年生存率从I期的60％降到IV期的1％。尽管在肺癌的检测方法上取得了较大进展，但目前仍有约70％的病人在确诊时已处于肺癌晚期。对非小细胞肺癌不同亚型的治疗施加相似的治疗方法而没有考虑亚型之间的异质性是影响非小细胞肺癌治疗效果的重要原因。尽管目前神经元特异性烯醇化酶、细胞角蛋白片段21-1、癌胚抗原、糖类抗原等肿瘤标志物用于肺癌的检测和术后评估，但是这些肿瘤标志物对肺癌，尤其是不同肺癌亚型的特异性和敏感性不够。非小细胞肺癌的分型和诊断仍主要依靠细胞物理形态进行判断，发展能从分子水平上反映非小细胞肺癌特征的新试剂，并用以进行亚型分类和早期诊断是降低非小细胞肺癌死亡率重要手段。

核酸适体(Aptamer，又称适配体，适配子)是能高亲和性、高特异性的结合某种生物靶标的单链寡核酸分子(ssDNA或ssRNA)。已报道核酸适体的靶标包括金属离子、有机小分子、多肽、蛋白质、细胞甚至组织等。核酸适体的分子识别功能与抗体类似，但与抗体相比具有很多优良的特性，如无免疫原性、容易合成与标记、快速的穿透组织、良好的代谢动力学、不同批次之间产品不会存在差异和具有很好化学稳定性，在生物检测、疾病诊断治疗等领域具有重要的应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于不同亚型非小细胞肺癌分型的核酸适体及其筛选方法。

本发明提供的核酸适体，是含有序列表的序列1至序列9中任一所示的核苷酸的DNA片段。

所述核酸适体具体可为序列表的序列1至序列16中任一所示的DNA片段。

核酸适体1：5’-CGCGCGCG-3’；见序列表的序列10；其中加粗下划线标记的为目标序列，见序列表的序列1；

核酸适体2：5’--3’；见序列表的序列2；

核酸适体3a：5’-ATGCCACGTGGCAT-3’；见序列表的序列11；其中加粗下划线标记的为目标序列，见序列表的序列3；

核酸适体3b：5’-TCGGATGCGCATCCGA-3’；见序列表的序列12；其中加粗下划线标记的为目标序列，见序列表的序列4；

核酸适体3c：5’-CCACTACGTAGTGG -3’；见序列表的序列13；其中加粗下划线标记的为目标序列，见序列表的序列5；

核酸适体3d：5’-GATCGATC-3’；见序列表的序列14；其中加粗下划线标记的为目标序列，见序列表的序列6；

核酸适体3e：5’-CGAACATGTTCG-3’；见序列表的序列15；其中加粗下划线标记的为目标序列，见序列表的序列7；

核酸适体3f：5’-GATTAATTAATC-3’；见序列表的序列16；其中加粗下划线标记的为目标序列，见序列表的序列8；

核酸适体4：5’--3’；见序列表的序列9。

其中，每条DNA序列中目标序列以外的核苷酸可用其它互补的核苷酸代替。

其中，核酸适体3a、核酸适体3b、核酸适体3c、核酸适体3d、核酸适体3e和核酸适体3f，包含一保守序列G₁T₁GGGTGGGG₂GGGT₂G₃GA。其中G₁可以删除，T₁可被核苷酸A取代，G₂可以被核苷酸C或TT取代，T₂可以被核苷酸A取代，G₃可以被核苷酸A取代或删除。

还可将所述核酸适体进行修饰或改造，得到所述核酸适体的衍生物，所述核酸适体的衍生物可为：

a)将所述核酸适体删除部分或增加部分互补的核苷酸，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物。

b)将所述核酸适体进行核苷酸取代或部分修饰，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物。

c)将所述核酸适体的骨架改造为硫代磷酸酯骨架，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物。