[发明专利]一种用于不同亚型非小细胞肺癌分型的核酸适体及其筛选方法

权利要求书

1.核酸适体，为序列表的序列2所示的DNA片段。

2.权利要求1所述核酸适体在不同亚型非小细胞肺癌细胞分型中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述不同亚型的非小细胞肺癌细胞为腺癌亚型细胞、大细胞癌亚型细胞或鳞癌亚型细胞。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述腺癌亚型细胞为A549细胞；所述大细胞癌亚型细胞为HLAMP细胞或NCI-H460细胞；所述鳞癌亚型细胞为NCI-H520细胞或NCI-H157细胞。

5.筛选权利要求1所述核酸适体的方法，包括如下步骤：用靶细胞对核酸文库进行筛选，得到与靶细胞特异结合的核酸适体；所述核酸文库为单链的随机核苷酸序列的文库；所述靶细胞为非小细胞肺癌细胞中的亚型细胞。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述筛选的方法包括如下步骤：

(1)以所述核酸文库为起始核酸文库；

(2)将所述起始核酸文库的溶液与靶细胞孵育，靶细胞与起始核酸文库中部分核酸分子结合，分离，得到与靶细胞结合的核酸文库；

(3)将所述与靶细胞结合的核酸文库的溶液与非靶细胞孵育，分离去除与所述非靶细胞结合的核酸分子，得到与靶细胞特异结合的核酸分子；

(4)得到核酸适体。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，还包括如下步骤：在得到与靶细胞结合的核酸文库后，PCR扩增所述与靶细胞结合的核酸文库，并制备成单链；所述步骤(3)中，还包括如下步骤：在得到与靶细胞特异结合的核酸分子后，PCR扩增与靶细胞特异结合的核酸分子，并制备成单链。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于：所述筛选的方法中，在所述步骤(3)之后、步骤(4)之前，包括至少1次以下操作：以所述与靶细胞特异结合的核酸分子为起始核酸文库，重复步骤(2)和(3)，每次操作均以前一次操作中得到的与靶细胞特异结合的核酸分子为起始核酸文库。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述靶细胞为腺癌亚型细胞；所述非靶细胞为大细胞癌亚型细胞。