[发明专利]一种新型红细胞代用品-人工红细胞荧光纳米粒的制备方法

权利要求书

1.一种通过戊二醛交联及聚乳酸、聚乙二醇共聚物(PLA-PEG)纳米粒包埋牛血红蛋白与过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)以及碳酸酐酶(CA)交联生成PolyHb-SOD-CAT-CA复合体，以制备一种具有治疗意义人工红细胞纳米粒的方法。

2.如权利要求1所述PolyHb-SOD-CAT-CA复合体，其特征在于：

(1)通过戊二醛交联牛血红蛋白与过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)以及碳酸酐酶(CA)生成；

(2)过氧化氢酶∶超氧化物歧化酶∶碳酸酐酶∶血红蛋白的比例为300,000U∶15,000U∶100U∶1g；

(3)PolyHb-SOD-CAT能在较大程度上消除了氧自由基及过氧化物，另外，它还能抑制聚合血红蛋白制备过程中高铁血红蛋白的形成，不仅在血液替换时能预防缺血再灌注损伤(I/R-I)的发生，还有潜力成为I/R-I治疗剂，以治疗其他原因造成的I/R-I；

(4)交联的碳酸酐酶(CA)对碳酸和重碳酸离子起到迅速转换的作用，在血液中维持酸碱平衡，并帮助排除二氧化碳。

3.如权利要求1所述戊二醛交联反应，其特征在于：

(1)戊二醛与血红蛋白摩尔比为17∶1；

(2)交联反应操作过程在4℃，通氮气保护环境下进行；

(3)交联反应前赖氨酸与血红蛋白摩尔比为10∶1。

4.如权利要求1所述聚乳酸、聚乙二醇共聚物(PLA-PEG)，其特征在于：

(1)PLA-PEG共聚物可溶于丙酮；

(2)PLA-PEG制备采用的DL一聚乳酸分子量为6,000-16,000；

(3)PLA-PEG制备采用的甲氧基聚乙二醇分子量为2,000-5,000；

(4)PLA-PEG制备采用2一乙基己酸亚锡催化反应。

5.如权利要求1所述人工红细胞纳米粒，其特征在于：

(1)人工红细胞纳米粒包埋材料由PLA-PEG共聚物与氢化的大豆卵磷脂混合反应生成；

(2)人工红细胞纳米粒包埋材料采用0.05％香豆素-6作为荧光标记物；

(3)人工红细胞纳米粒制备整个操作过程在4℃和氮气保护下完成；

(4)纳米粒包埋PolyHb-SOD-CAT-CA增加了该复合体的稳定性，延长其体内半衰期。

6.如权利要求1所述牛血红蛋白，其特征在于：

(1)通过低渗溶牛血红细胞制备得到；

(2)牛血红蛋白制备步骤包括：甲苯抽提、高速离心净化、离子交换层析；

(3)牛血红蛋白制备采用低渗溶液为12.5mM、pH 7.4的磷酸钾缓冲液；

(4)牛血红蛋白制备整个操作过程在4℃和氮气保护下完成；

(5)牛血红蛋白比人血红蛋白更稳定，而且不需要2，3-二磷酸甘油酸(2，3-DPG)来调节载氧能力，聚合后其值P₅₀接近天然血红蛋白；

(6)交联后牛血红蛋白基本无免疫原性。