[发明专利]一种基于转基因技术的阿尔茨海默病病理模型的建立方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种基于转基因技术的阿尔茨海默病病理模型的建立方法。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer disease，AD)是一种进行性发展的神经退行性疾病，病因未明，又称为老年痴呆。随着世界人口老龄化的加剧，AD患病率逐年上升，AD病人的治疗费用惊人，给社会造成极大负担。AD患者大脑皮质、海马神经元存在大量的神经纤维缠结(neurofibrillary tangles，NFT)是AD的重要组织病理标志之一。NFT是高度磷酸化的tau蛋白聚积形成的。到目前为止，AD的发病机制，以及AD的典型病理标志一一NFT现象发生的机制尚未得到阐明，给AD的预防和治疗造成极大困难。

目前阿尔茨海默病动物模型多采用施加外伤和药物诱导的方法，在实验过程中难免会受到创伤、药物等造成的多种干扰因素，导致结果难以分析。

发明内容

本发明主要是解决现有技术所存在的创伤、药物等造成的多种干扰因素，导致结果难以分析等的技术问题；提供了采用转基因技术建立的疾病模型具有遗传背景清楚、遗传物质改变简单、更自然更接近疾病的真实症状的一种基于转基因技术的阿尔茨海默病病理模型的建立方法。

本发明的上述技术问题主要是通过下述技术方案得以解决的：

一种基于转基因技术的阿尔茨海默病病理模型的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，构建一线性转基因序列，该序列从5’至3’依次含有CMV增强子，Hchicken β-actin启动子，HO-1cDNA编码序列，终止信号rabbitβ-globin poly(A)sequence，

步骤2，应用显微注射方法将构建的基因序列注入C57BL/6/DB(BDF1)小鼠受精卵；

步骤3，将步骤2中的受精卵植入假孕鼠的输卵管；

步骤4，产生F0代转基因小鼠，该小鼠基因组中整合有外源性HO-1表达序列；

步骤5，将获得的阳性转基因小鼠与正常小鼠杂交，获得子代。

在上述的一种基于转基因技术的阿尔茨海默病病理模型的建立方法，其特征在于，所述的HO-1为heme oxygenase 1，血红素加氧酶1。

因此，本发明具有如下优点：具有遗传背景清楚、遗传物质改变简单、更自然更接近疾病的真实症状。

附图说明

附图1是线性转基因序列，该序列从5’至3’依次含有增强子，启动子，HO-1(heme oxygenase 1，血红素加氧酶1)内含子，HO-1cDNA编码序列，终止序列；

附图2是对转基因小鼠和野生型小鼠的HO-1的mRNA水平进行比较，转基因小鼠的HO-1表达水平明显高于野生型小鼠；

附图3是对转基因小鼠和野生型小鼠的HO-1的蛋白水平进行比较，转基因小鼠的HO-1表达水平明显高于野生型小鼠；

附图4是对转基因小鼠和野生型小鼠脑的海马和皮质组织进行tau蛋白的免疫组织化学染色，转基因小鼠脑海马和皮质组织中的tau蛋白表达水平明显高于野生型小鼠；

附图5是对转基因小鼠和野生型小鼠脑的海马和皮质组织中的tau蛋白进行western bloting检验，转基因小鼠脑海马和皮质组织中的tau蛋白表达水平明显高于野生型小鼠

附图6是对转基因小鼠和野生型小鼠脑的海马和皮质组织中(199/202)位点发生磷酸化的tau蛋白进行western bloting检验，转基因小鼠脑海马和皮质组织中的(199/202)位点发生磷酸化的tau蛋白表达水平明显高于野生型小鼠。

具体实施方式

下面通过实施例，并结合附图，对本发明的技术方案作进一步具体的说明。

实施例：

1.线性转基因序列，该序列从5’至3’依次含有CMV增强子，chickenβ-actin启动子，HO-1(heme oxygenase 1，血红素加氧酶1)cDNA编码序列，终止信号rabbitβ-globin poly(A)sequence，如图1所示；

2.显微注射方法将构建的基因序列注入小鼠受精卵；

3.将步骤2中的受精卵植入假孕鼠的输卵管；

4.产生FO代转基因小鼠，该小鼠基因组中整合有外源性HO-1表达序列；

5.对步骤4获得的转基因小鼠进行鉴定；

6.将获得的阳性转基因小鼠与正常小鼠杂交，获得子代；

7.对转基因小鼠和正常小鼠的HO-1的mRNA水平、蛋白水平以及酶活性进行比较；