[发明专利]一种适用于植物组织培养的抑菌剂组合物及使用方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域中的植物组织培养技术；涉及一种适用于植物组织培养的抑菌剂组合物及使用方法。

背景技术：

植物组培苗工厂化生产在我国发展速度很快，组织培养各方面的技术日渐完善。但在组织培养中常常出现不同程度的污染。据了解，很多学者在初代培养这一阶段，很难得到无菌苗，或者虽然在初代培养得到了无菌苗，但在继代培养时往往出现大量污染甚至全部污染。因此，控制或降低污染率是植物组织培养工厂化生产中不可忽视的关键技术环节，同时也是衡量组织培养工作效率高低的重要指标之一。从植物组织培养的全过程来看，每一环节都可能出现污染，为了实现低污染率，在组织培养过程中除了加强无菌意识，提高无菌操作各环节的技术规程，注重无菌操作训练，提高操作水平外，同时在培养基中针对性的加入抑菌剂、抗菌素等，也是减少或防止真菌和细菌污染的重要手段和方法。研究和筛选、推广使用新型抑菌剂，对于减少或防止真菌和细菌污染、降低种苗生产成本，具有十分重要的意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种适用于植物组织培养的抑菌剂组合物及使用方法。用于植物组织培养中，可减少或防止真菌和细菌污染的抑菌剂组合物。它可广泛应用于植物组织培养快速繁殖、再生植株体系建立等植物生物技术领域。

本发明的技术方案是：

适用于植物组织培养的抑菌剂组合物(以下简称抑菌剂)是指含ε-聚赖氨酸、异噻唑啉酮和中草药诃子、千里光、香薷水提物及其他如柠檬酸、苯甲酸钠及稳定剂等。用于植物外植体消毒处理中，先用本发明的抑菌剂浸泡后再常规消毒处理，可减少升汞或次氯酸钠的消毒时间，从而到既灭菌又可保持外植体较高存活率的目的；在初代或继代培养基中加入抑菌剂，可以有效减少或防止真菌和细菌污染，使植物组织正常生长发育，对植物的生根、生长、分化等几乎无不良影响，提高组织培养成功率；应用在植物开放式组织培养中，如植物培养后期的壮苗生根阶段，可用塑料杯(瓶、盒)作培养容器，省去培养基高压灭菌程序，且不需超净工作台也可接种，脱离严格无菌的操作环境，可以节约大量的能源、大大降低了植物组培苗的生产和运输成本。

一种适用于植物组织培养的抑菌剂，其特征在于：其组成成分及配比为：

在抑菌剂组合物总体积100ml中含有：

ε-聚赖氨酸2.5ml，其中有效含量≥50％、

异噻唑啉酮混合物，其中有效含量≥50％ 22～29.5ml、

中草药水提物10～15ml：中药水提物由诃子、千里光及香薷1∶1∶2加水浸泡4h后用温火煎煮而成，每100ml中含生药4g、

柠檬酸、苯甲酸钠水溶液，其浓度为3.5％ 2.5ml、

稳定剂：MgCl₂，水溶液，其浓度5.5％ 3.5ml、

无离子水47.0～59.5ml。

所述的一种适用于植物组织培养的抑菌剂，其使用方法：

1)用于植物外植体消毒处理中，先用抑菌剂浸泡后，再常规消毒处理，可减少升汞或次氯酸钠的处理时间；

2)在初代或继代培养基中加入抑菌剂0.25～0.4％，可有效减少或防止真菌和细菌的污染；

3)应用在植物开放式组织培养中，如植物培养后期的壮苗生根阶段，加入该抑菌剂，可省去培养基高压灭菌程序，不需超净工作台也可接种。

所述一种适用于植物组织培养的抑菌剂，其使用方法：

1)应用该抑菌剂时，植物组织培养可在无菌或相对较少有菌条件下实施；其详细过程包括：

(1)按先后顺序取ε-聚赖氨酸2.5ml、异噻唑啉酮混合物，有效含量≥50％，的22～29.5ml、中草药水提物10～15ml、柠檬酸、苯甲酸钠2.5ml，放入100ml容量瓶中，震荡混合均匀，再加入稳定剂3.5ml，用无离子水定容于100ml，倒入棕色试剂瓶中，放置于4℃冰箱中保存备用；

(2)将培养基煮沸溶解，进行常规的高温高压灭菌。待培养基冷却至45℃左右后，以配制1L培养基计算，在培养基中加入该抑菌剂2.5～4.0ml，然后分装于已高温高压灭菌的培养容器内；

(3)分装后，用封口膜、聚丙烯膜、玻璃纸或硫酸纸扎紧瓶口；

(4)将分装封口后的培养基，放入操作室冷却，备用；

(5)植物外植体在超净工作台内进行常规消毒处理后，将其直接接种于含有抑菌剂的培养基中；

(6)接种后的日常管理：将接种后的培养材料置于满足植物组织培养的温度、光照条件的房间或设施内进行培养；

(7)壮苗生根培养可以在相对较少有菌的条件下实施：培养基无需高压灭菌，接种也不需超净工作台。