[发明专利]一种枯草芽孢杆菌抗菌脂肽的生产方法及其在饲料中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种枯草芽孢杆菌抗菌脂肽的生产方法及其在肉鸡饲料中的应用，属于农业领域中的畜牧养殖技术领域和生物技术领域。涉及利用抗菌肽替代饲料中抗生素的添加，减少鸡肉中抗生素的残留和保障食品的安全。

背景技术

饲料安全即食品安全的概念在世界范围内已成为共识。食品和饲料在美国属于同一管理范围，适用于同一部法律；丹麦政府为了保证食品安全，制定了饲料生产中禁止使用抗生素的规定；欧盟已禁止在动物饲养中使用抗生素作为饲料促进剂。随着人民生活水平的提高，对动物产品的需求量越来越大，对绿色食品的呼声越来越高。我国是养殖生产大国，但畜产品的出口比例相当低下，与我国作为一个畜产品生产大国的地位极不相称。我国的一些农副产品由于农药、抗生素等药物残留，重金属含量等技术指标超过欧盟及主要进口国的质量标准，被拒收、扣留和终止合同等。近年来，畜产品中的抗生素药物残留问题越来越受到人们的重视，我国已严格限制将某些抗生素作为保健和促生长剂用于饲料。2002年，农业部发布了《动物性食品中兽药最高残留限量》公告，这表明传统抗生素必将逐渐淡出历史舞台，寻找安全高效的抗生素替代品就显得十分重要，鉴于抗生素的不利影响，开发通过调整动物胃肠道平衡而达到促进生长、维持动物健康、无毒副作用的绿色饲料添加剂已成为人们研究的热点。特别是在我国未来养殖业的发展中，政府将进一步加大对饲料、兽药与畜产品卫生安全的监管力度，积极推动发展绿色养殖业。因此，应用现代高科技手段研究和开发安全、高效、环保的抗菌添加剂，保障动物和人类自身的健康与安全，才能使我国由养殖生产大国成为养殖生产强国，实现养殖业的现代化。

国外对抗菌肽已有较多研究，在动物生产实际中也已开始应用，其作为饲料添加剂的使用效果已被实验证实，并已形成一定的市场需求。但一般抗菌肽的抗菌谱窄，通常只能抑制革兰氏阳性菌。动物源抗菌肽天然资源有限，限制了在饲料中的大规模使用。微生物抗菌制肽由10个以下的氨基酸和一个脂肪酸组成一个环形的多肽分子，它和动物源抗菌肽相比，具有广谱高效抗菌的优势。利用微生物发酵生产抗菌肽脂，可大规模工业化生产，生产周期短，生产成本大大降低，且不受季节和气候变化等外在环境的影响，是克服抗菌肽实际应用技术瓶颈的最佳途径。

发明内容

技术问题

针对饲料中抗生素的使用导致导致食品安全的问题和动物源抗菌肽生产量低的问题。本发明利用枯草芽孢杆菌生产抗菌肽的方法及其产品在鸡饲料中的应用。发明目的之一：抗菌肽生产方法及产品。发明目的之二：在鸡饲料中的添加方法。

技术方案

一种来自枯草芽孢杆菌的抗菌脂肽的生产方法，包括：

以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)fmbJ，种子培养基扩大培养，种子培养基：胰蛋白胨10.0g，酵母膏5.0g，NaCl 5.0g，蒸馏水1000ml，pH7.2；体积比2～5％接种，28～35℃，5000L发酵罐液体深层发酵30～48h，液体发酵培养基：葡萄糖20.0g/L，胰蛋白胨5.0g/L，谷氨酸钠2～5％，MgSO₄0.5g/L，KCl 0.5g/L，KH₂PO₄1g/L，FeSO₄0.15mg/L，MnSO₄5.0mg/L，CuSO₄0.16mg/L，pH7.0；发酵工艺参数为：温度28～35℃，搅拌转速180r/min，通气量80m³/h，罐压0.10～0.12Mpa，pH7.0，消泡剂0.3％；发酵液经离心去除菌体，然后在上清液中加入HCl调整pH至2.0，静置后离心，沉淀按发酵液体积分数25～30％加乙醇并调pH至7.0，进一步提取，提取物经赋型剂(麦芽糊精∶多孔淀粉＝6～9∶1)吸附、干燥，或直接进行吸附、干燥，得抗菌肽成品，产品抗菌效价为20000～300000IU/g。消泡剂为聚醚、硅油或大豆油，优选大豆油。

所述的枯草芽孢杆菌fmbJ抗菌脂肽在肉鸡饲料中的应用，其特征为：在肉鸡基础日粮中按照4000U/kg添加所述的抗菌脂肽，提高鸡的饲料利用率，并能够在一定程度上促进肉鸡中枢免疫器官的发育，并通过提高三碘甲状腺氨酸(T₃)和血清中的促甲状腺激素释放激素(TSH)水平，降低甲状腺素(T₄)水平而提高机体免疫力。添加抗菌脂肽对肉鸡的生长发育和免疫机能具有较好的调节和促进作用。

有益效果

本发明的主要优点和积极效果如下：