[发明专利]一种利用牙签接种法鉴定番茄对番茄黄化曲叶病毒抗性的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种番茄黄化曲叶病毒抗性鉴定方法，属植物保护领域。

背景技术

番茄黄化曲叶病是番茄上一种毁灭性的病毒病，该病自1964年首次报道以来，在欧洲、非洲、亚洲、加勒比海及大洋州等地区都有发生危害的报道，特别是近年来，随着全球气候变暖和耕作制度的改变以及国际间贸易的增加，番茄黄化曲叶病在全球范围传播，给番茄生产造成了严重损失。1991-1992年该病在美国佛罗里达州番茄上暴发，造成的损失达1.4亿美元。

在我国，由番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus，TYLCV)导致的番茄黄化曲叶病最早于2006年在上海和浙江出现危害报道，番茄受其侵染后早期会表现叶缘黄化、上卷，叶片变小、植株矮缩；后期整株上部呈现簇缩状，花萎蔫，座果率大大降低，严重影响番茄的产量和质量，发病重的棚室多造成绝产绝收，经济损失巨大。2007年该病传入江苏、安徽、山东危害，随后在河北、北京、天津、内蒙古等省市也相继出现危害，扩展蔓延速度十分惊人，同时造成的危害也异常惨重。2008年末到2009年初仅河北邯郸市因番茄黄化曲叶病造成的直接经济损失就近1亿元。目前该病已经逐渐成为当前我国番茄生产上一个重要的制约因素。

在大多数植物病毒病的防治中，抗性品种是最为经济有效的防治措施，而在抗性资源的发掘及利用中，抗性鉴定方法是必不可少的一个关键环节。由于番茄黄化曲叶病毒是一种烟粉虱传播的病毒，因此长期以来该病毒的抗性鉴定多采用烟粉虱接种鉴定法，但是该方法操作过程中需要烟粉虱来完成传毒，因此存在一些难于克服的问题：1、烟粉虱的接种虫量难于控制，由于烟粉虱的生活周期非常短，世代重叠现象非常严重，导致其群体增殖能力非常强，而烟粉虱的个体又非常小，因此无论是在田间还是在室内，单株上接种的烟粉虱数量很难控制；2、带毒烟粉虱的接种数量难于控制，由于烟粉虱本身的接种虫量难于控制，也导致了其中带毒烟粉虱的接种虫量难于计量；3、烟粉虱的传毒效率难于控制，由于烟粉虱是一种传毒昆虫，只有在其取食的过程中才能实现传毒，而其取食受诸多因素影响，如温度、湿度、光照、寄主等等，这些因素会影响其取食次数及取食量，对传毒效率产生影响，进而对鉴定结果的准确性也产生影响；4、由于烟粉虱传播的病毒非常多，因此使用烟粉虱接种番茄黄化曲叶病毒的时候，烟粉虱可能同时携带其它病毒，影响接种鉴定结果。

为了解决烟粉虱接种鉴定方法上存在的问题，我们创制了一种基于侵染性克隆接种鉴定的方法，该方法操作简便，重复性好，可控性好，效率高，结果准确，为抗番茄黄化曲叶病毒的番茄材料的研究及利用提供了一种新方法。

发明内容

本发明克服了现有技术中的缺点，为番茄黄化曲叶病毒的抗性鉴定提供了一种快速、简便、有效的方法。

1、抗性鉴定的材料：

含PTYj01的农杆菌保存于江苏省农科院植保所病害室(江苏省南京市孝陵卫钟灵街50号，210014)，YEP培养基及抗生素的配制参照《分子克隆实验指南(第三版)》。

2、抗性鉴定方法

a)将含有PTYj01的农杆菌接种含50mg/ml的卡那霉素(Kanamycin)和50mg/ml的利福平(Rifamycin)的YEP液体培养基中，28℃150rpm培养至OD₆₀₀达到0.6-0.8。

b)常规条件下育苗，2片真叶时移至一次性营养钵中，3-4片叶时进行接种处理。

c)用牙签尖头蘸取菌液于3-4叶期番茄茎杆韧皮部刺伤3-4处(每刺伤1处蘸取菌液1次)，处理后的番茄于温室(温度为25-28℃)内放置1-2天，而后移置田间或者温室，观察发病情况。

d)15-30天统计发病情况，计算发病率，评价番茄材料对番茄黄化曲叶病毒的抗性：发病率高的材料表现感病，发病率低的材料表现抗病。

本发明的有益效果是只需简单的牙签刺伤茎杆就实现了番茄黄化曲叶病毒的抗性鉴定。避免了常规烟粉虱接种鉴定方法的上的缺陷，无需饲养烟粉虱，无需繁琐的操作，同时该方法还具有鉴定结果准确、重复性好、效率高等优势。

附图说明

具体实施方式

实例一：

以番茄材料合作903大红、001、002、747为研究对象，通过牙签接种法鉴定其对番茄黄化曲叶病毒的抗性。

1、实验处理