[发明专利]一种无需提取动物组织DNA的直接PCR方法

权利要求书

1.一种无需提取动物组织DNA的直接PCR方法，其特征在于，以动物组织消化液为模板直接进行PCR扩增。

2.根据权利要求1所述的PCR方法，其特征在于，所述动物组织消化液按如下步骤获得：将动物组织与组织裂解液混合，37～55℃温育25～30min，95℃变性5min。

3.根据权利要求2所述的PCR方法，其特征在于，所述动物组织消化液按如下步骤获得：动物组织与组织裂解液混合，55℃温育30min，95℃变性5min。

4.根据权利要求1、2或3所述的PCR方法，其特征在于，所述组织裂解液由Tris-Cl、EDTA、蛋白酶K和NaCl组成。

5.根据权利要求4所述的PCR方法，其特征在于，所述Tris-Cl的浓度为10～100mM，pH8.0，所述的EDTA浓度为1～4mM，pH8.0，所述的蛋白酶K的浓度为100～200μg/ml，所述的NaCl的浓度为0～0.8M。

6.根据权利要求5所述的PCR方法，其特征在于，所述的Tris-Cl的浓度为10mM，所述的EDTA浓度为2mM，所述的蛋白酶K的浓度为200μg/ml，所述的NaCl浓度为0.2M。

7.根据权利要求1所述的PCR方法，其特征在于，所述的动物组织选自耳组织、血液或毛发。

8.根据权利要求7所述的PCR方法，其特征在于，所述的毛发带有毛囊。

9.根据权利要求1所述的PCR方法，其特征在于，所述的PCR的反应体系如下：

终浓度为250μM dNTP，10mMTris-Cl，pH8.3，50mM KCl，1.5mMMgCl₂，2pM上游引物，2pM下游引物，2μl组织消化液，1U Taq DNA聚合酶，用ddH₂O补足至20μl。

10.根据权利要求1所述的PCR方法，其特征在于，所述PCR的反应条件如下：

94℃预变性4min，94℃变性30s，61℃复性30s，72℃延伸20～40s，40个循环，然后72℃延伸7min，最后16℃保温。