[发明专利]一种获取古代动物遗传信息的方法

权利要求书

1.一种古代动物DNA的提取方法，包括以下步骤：

1)将古代动物样品置于裂解缓冲液中裂解，收集裂解液；

2)向上述步骤1)中得到的裂解液中加入与所述裂解液等体积的助沉缓冲液进行处理，离心得到上清液；所述助沉缓冲液的溶剂是水，溶质是醋酸钾和氯化锂，所述助沉缓冲液中醋酸钾的浓度为1.40-1.45mol/L，氯化锂的浓度为4.25-4.30mol/L；

3)往上述步骤2)中得到的上清液加入异丙醇，离心，得到古代动物DNA沉淀；所述异丙醇的体积是所述上清液体积的0.6-1倍。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)中，所述裂解缓冲液是以水为溶剂，以Tris·Cl、NaCl、EDTA和SDS为溶质配制而成，所述Tris·Cl、NaCl、EDTA和SDS的终浓度为如下：Tris·Cl 100mmol/L，NaCl 100mmol/L，EDTA 100mmol/L，SDS 0.5％(质量百分比)。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤1)中，所述古代动物样品为古代动物的骨骼或牙齿；所述古代动物样品在置于裂解缓冲液中裂解之前经过粉碎步骤，所述粉碎步骤得到的粉末与所述裂解缓冲液的体积比是1∶2。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：步骤1)中，所述裂解液是将所述裂解后的溶液经过离心得到的上清液，所述离心的转速为12000g，离心时间为5分钟。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：步骤2)中，所述助沉缓冲液中醋酸钾的浓度为1.43mol/L，氯化锂的浓度为4.29mol/L。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：步骤2)中，所述处理的步骤是在冰上进行的，所述冰上进行的时间为25-35分钟，优选为30分钟；所述离心条件为12000g，15分钟。

7.根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：步骤3)中，所述离心条件为12000g，30分钟；所述离心步骤之前还包括一静置步骤，所述静置的时间为100-150分钟，优选为120分钟，静置的温度条件为-20℃。

8.根据权利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于：步骤3)中，所述异丙醇是经-20℃预冷的；所述异丙醇的体积是所述上清液体积的1倍。

9.根据权利要求1-8中任一所述的方法，其特征在于：所述方法还包括步骤3)之后的洗涤步骤；所述洗涤是往上述步骤3)得到的DNA沉淀中加入浓度为70g/100ml的乙醇水溶液，轻弹管壁后离心去上清；所述洗涤次数为1次或2次；所述离心条件为12000g，1分钟。

10.一种获取古代动物遗传信息的方法，是往权利要求1-9中任一所述的方法得到的DNA沉淀中加入水得到DNA提取液，将所述DNA提取液进行PCR扩增测序，得到古代动物遗传信息。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于：所述PCR扩增测序包括如下步骤：

a)将提取所得的DNA提取液作为模板，进行PCR扩增，测序；

b)将提取所得的DNA提取液作为模板，在常规PCR扩增反应之前加入一个去除受损伤模板的步骤，再进行去除受损伤模板后的PCR扩增，然后测序；

c)将步骤a)和b)的两个结果进行比对分析，得到古代动物遗传信息。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于：步骤b)中，所述去除受损伤模板的步骤是往所述PCR扩增反应体系中加入尿嘧啶糖苷酶进行处理；所述尿嘧啶糖苷酶的用量是每25μlPCR扩增反应体系中加入1U的尿嘧啶糖苷酶；所述处理的温度是37℃，处理的时间5min。