[发明专利]一种结核分枝杆菌38Kd-16Kd-CFP10重组融合蛋白及其应用无效
| 申请号： | 201010230986.3 | 申请日： | 2010-07-20 |
| 公开（公告）号： | CN101914563A | 公开（公告）日： | 2010-12-15 |
| 发明（设计）人： | 张娟;蒋俊;董亚俊;吴雪琼 | 申请（专利权）人： | 沈阳市胸科医院 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C12N15/63;C12N1/21;C07K19/00;C07K16/12;G01N33/543;G01N33/569;A61K39/04;A61P31/06;C12R1/19 |
| 代理公司： | 沈阳杰克知识产权代理有限公司 21207 | 代理人： | 金春华 |
| 地址： | 110044 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 结核 分枝杆菌 38 kd 16 cfp10 重组 融合 蛋白 及其 应用 | ||
1.一种编码结核分枝杆菌38Kd-16Kd-CFP10重组融合蛋白的融合基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.一种结核分枝杆菌38Kd-16Kd-CFP10重组融合蛋白，其特征在于：它由权利要求1所述的融合基因编码，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
3.一种结核分枝杆菌38Kd-16Kd-CFP10重组融合蛋白的表达载体，其特征在于：它是将权利要求1所述的融合基因按照如图1所示的构建方式插入到质粒pET-28b上得到的重组质粒pET-28b-38Kd-16Kd-CFP10。
4.一种表达结核分枝杆菌38Kd-16Kd-CFP10重组融合蛋白的工程菌株，其特征在于：它含有权利要求3所述的表达载体pET-28b-38Kd-16Kd-CFP10，其宿主菌为大肠杆菌(Escherichia coli)。
5.一种结核分枝杆菌抗体IgG酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：它包括权利要求2所述的38Kd-16Kd-CFP10重组融合蛋白和酶标二抗。
6.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于：38Kd-16Kd-CFP10重组融合蛋白的包被量为2.0μg/孔，酶标二抗工作浓度为4.0mg/mL。
7.一种结核分枝杆菌抗体IgG诊断试剂盒，它包括TB抗原、胶体金标记TB抗原和质控线包被兔抗TB抗体，其特征在于：所述TB抗原和胶体金标记TB抗原均是由根据权利要求2所述的38Kd-16Kd-CFP10重组融合蛋白制得。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：TB抗原喷点浓度为0.25-2.0mg/mL，胶体金标记TB抗原染色液的工作浓度为OD值50.0-100.0，TB抗原喷点量为0.5-1.75μL/cm，胶体金标记TB抗原喷点量为0.5-1.75μL/cm，质控线包被兔抗TB抗体包被浓度为0.5-2.0mg/mL，反应膜封闭时间为45-75分钟，反应膜干燥条件为相对湿度25％-30％下干燥30-75分钟，胶体金标记TB抗原垫干燥条件为相对湿度25％-30％下干燥3-5小时，标本检测反应时间为15℃～30℃下反应10-30分钟，温度低于15℃时标本检测反应时间40-50分钟。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于：TB抗原喷点浓度为1.0mg/mL，胶体金标记TB抗原染色液的工作浓度为OD值80.0，TB抗原喷点量为1.0μL/cm，胶体金标记TB抗原喷点量为1.0μL/cm，质控线包被兔抗TB抗体包被浓度为1.0mg/mL，反应膜封闭时间为60分钟，反应膜干燥条件为相对湿度25％-30％下干燥60分钟，胶体金标记TB抗原垫干燥条件为相对湿度25％-30％下干燥4小时，标本检测反应时间为15℃～30℃下反应25-30分钟。
10.根据权利要求2所述的结核分枝杆菌38Kd-16Kd-CFP10重组融合蛋白在制备单抗、多抗、检测试剂盒、蛋白芯片和疫苗中的应用。
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