[发明专利]一种结核分枝杆菌38Kd-11Kd-CFP10重组融合蛋白及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地涉及一种结核分枝杆菌重组融合蛋白及其应用。

背景技术

结核病是由结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis，TB)感染所致的人类疾病，是分支杆菌病的主要类型，主要通过呼吸道传播。自1882年德国科学家Rrobert Koch发现TB以来，全球约有两亿人死于TB，且疫情发展日趋严重。据WHO预计，全球现有TB病人2000万，如不控制今后10年还将有9000万人发病。我国现有3.3亿结核菌感染者，肺结核病人600多万，其中有严重传染性的病人150万，每年死于结核病的达25万人。因此，结核病的预防、早期诊断和及时治疗是高度关注的课题。MTB有H37Rv与H37Ra两种标准菌株，前者为毒力株而后者为减毒突变株，它们均来源于1934年的人肺H37分离株。与一些临床分离株不同的是，H37Rv对药物敏感、利于基因工程操作并在TB动物模型中保留了完整毒力，因而该菌株被广泛应用于TB相关的生物医药研究(MTb H37Rv project at Sanger Institute，NCBI)。目前常用的结核病诊断方法有胸部X光透视和主要依靠患者痰液、胸水、支气管肺泡液的显微镜直接涂片检查(AFP)和培养法，以及分子生物学和血清学检查，这些方法多基于高特异性的抗原建立。

本发明提供了一种用基因工程方法生产的结核重组融合蛋白作为抗原，与常用抗原相比特异性更强，用其作为抗原制备的免疫诊断试剂盒，可为结核病感染的检测提供更为特异、准确的工具。

发明内容

(一)要解决的技术问题

本发明的目的是提供一种结核分枝杆菌重组融合蛋白，并提供该结核分枝杆菌重组融合蛋白在制备单抗、多抗、检测试剂盒及蛋白芯片、疫苗研究中的应用。

(二)技术方案

本发明提供了一种编码结核分枝杆菌38Kd-11Kd-CFP10重组融合蛋白的融合基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明还提供了一种结核分枝杆菌38Kd-11Kd-CFP10重组融合蛋白，该重组融合蛋白由所述融合基因编码，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明提供了一种结核分枝杆菌38Kd-11Kd-CFP10重组融合蛋白的表达载体，该表达载体是将所述融合基因插入到质粒pET-28b上得到的重组质粒pET-28b-38Kd-11Kd-CFP10，其质粒图谱如附图1所示。

本发明又提供了一种表达结核分枝杆菌38Kd-11Kd-CFP10重组融合蛋白的工程菌株，该工程菌株含有表达载体pET-28b-38Kd-11Kd-CFP10，其宿主菌为大肠杆菌(Escherichia coli)。

本发明还提供了一种结核分枝杆菌抗体IgG酶联免疫检测试剂盒，它包括前述的38Kd-11Kd-CFP10重组融合蛋白和酶标二抗，所述38Kd-11Kd-CFP10重组融合蛋白的包被量为0.5-4.0μg/孔，酶标二抗工作浓度为2.0-16.0mg/mL。优选地，38Kd-11Kd-CFP10重组融合蛋白的包被量为2.0μg/孔，酶标二抗工作浓度为4.0mg/mL。

本发明提供了一种结核分枝杆菌抗体IgG诊断试剂盒，它包括TB抗原、胶体金标记TB抗原和质控线包被兔抗TB抗体，其中所述TB抗原和胶体金标记TB抗原均是由前述的结核分枝杆菌38Kd-11Kd-CFP10重组融合蛋白制得。

本发明所述的结核分枝杆菌抗体IgG诊断试剂盒，TB抗原喷点浓度为0.25-2.0mg/mL，胶体金标记TB抗原染色液的工作浓度为OD值50.0-100.0，TB抗原喷点量为0.5-1.75μL/cm，胶体金标记TB抗原喷点量为0.5-1.75μL/cm，质控线包被兔抗TB抗体包被浓度为0.5-2.0mg/mL，反应膜封闭时间为45-75分钟，反应膜干燥条件为相对湿度25％-30％下干燥30-75分钟，胶体金标记TB抗原垫干燥条件为相对湿度25％-30％下干燥3-5小时，标本检测反应时间为15℃～30℃下反应10-30分钟，温度低于15℃时标本检测反应时间40-50分钟。