[发明专利]对脑膜炎奈瑟氏菌抗原特异的核苷酸及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种核苷酸及其应用，尤其涉及一种对脑膜炎奈瑟氏菌抗原特异的核苷酸及其应用。

背景技术

脑膜炎奈瑟氏菌是一种革兰氏阴性菌，常在人的鼻咽部中发现，当寄居在人鼻咽部的脑膜炎奈瑟氏菌偶尔穿过鼻咽部的上皮进入血液或者进入脑脊液的时候，它就会在其中快速的繁殖，向全身快速的散播。它是儿童和成人细菌性脑膜炎和脓毒血症的主要致病因子，零星感染和较大范围的流行都可以见到。尽管抗生素可以有效地治疗这种疾病，但是病死率仍然很高，并且幸存者通常留有严重的肢体后遗症和严重的听力障碍。

引起脑膜炎病菌致病的必需毒力因子是它们的细胞外的多糖构成的荚膜。荚膜在细菌入侵宿主的时候起着特异或者非特异的防护作用。根据脑膜炎奈瑟氏菌的荚膜多糖的反应性和化学结构的不同分为13个血清群，它们是A、B、C、D、Y、W-135、29E、X、Z、H、I、K和L[Holst，J.(2007)，“Strategies for Development of Universal Vaccines Against MeningococcalSerogroup B Disease”.Human Vaccines.3：6，290-294，November/December2007]。其中A、B、C、W-135和Y是最常见的病原菌。血清群B，C，Y和W-135表达的荚膜全部含有唾液酸或者组成是唾液酸与葡萄糖或半乳糖相连，而血清群A由N-乙酰甘露糖1-磷酸组成的。

因为K-抗原是极强的抗原，是脑膜炎奈瑟氏菌重要的致病因素之一，同时它又具有较强的多样性。以表面多糖为目标的血清学免疫反应自上世纪30年代以来一直被用于对细菌的分型和鉴定，是鉴定致病菌的唯一的手段。这种诊断方法需要大量的抗血清，而抗血清一般种类不全，数量不足，大量的抗血清在制备和储存中也存在一些困难。另一方面此法耗时长、灵敏度低、漏检率高、准确性差，所以，现在普遍认为这种传统的血清学检测方法将为现代分子生物学方法取代。2006年爱尔兰的Bennett，D.等用多重PCR方法分出了七个群，2008年希腊的Drakopoulou，Z.等发明了能够检测A、B、C、Y、W-135等五个血清群的方法，这些方法都准确地分出了预定的血清群，能够快速有效地达到检测的目的。但这些分群方法没能把12个血清群的脑膜炎奈瑟氏菌都从分子生物学的角度上区分开来。本发明的检测血清群的数量几乎覆盖了全部。这种检测方法主要运用PCR技术。

聚合酶链式反应技术(Polymerase chain reaction，简称PCR技术)作为微生物检测的技术目前正在得到认同和推广，该技术相对于传统的方法有高通量、检测速度快、特异性强、灵敏度高等优点，只需对样品进行简单的预增菌或增菌过程，再通过离心及裂解制备细菌DNA模板，就可以在高特异性引物介导下的PCR过程中扩增目标序列，实现检测样品中是否含有待测的致病性微生物的目的。PCR的扩增过程仅需2个小时。这对检验检疫部门和临床检验无疑极大提高了工作速度和降低了工作成本。

不论从国内和国际的角度来看，快速、准确地鉴定出血清群，为细菌性脑膜炎的防控提供有效技术支持是十分重要的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种对脑膜炎奈瑟氏菌抗原特异的核苷酸，所述核苷酸包括：

1)SEQ ID NO：1-24所示的核苷酸中的至少一种；

2)与SEQ ID NO：1-24所示的核苷酸互补的核苷酸中的至少一种。

上述的核苷酸可以用于制备检测脑膜炎奈瑟氏菌用PCR试剂盒、基因芯片或微阵列。

本发明还提供一种PCR试剂盒，包括PCR引物、dNTP、缓冲液和DNA聚合酶，所述PCR引物包括上述的核苷酸。优选地，所述的PCR引物包括SEQ ID NO：1-24所示的核苷酸中的至少一种。

本发明还提供一种基因芯片，包括固相载体和固定在固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括上述的核苷酸。优选地，所述寡核苷酸探针包括SEQ ID NO：1-24所示的核苷酸中的至少一种。

本发明还提供一种微列阵，其包括上述的核苷酸。优选地，所述核苷酸包括SEQ ID NO：1-24所示的核苷酸中的至少一种。

与现有技术相比，本发明具有如下优点：

(1)实用性强

本发明提供血清群检测所用到的特异性的引物，利用该多重PCR方法可以对临床标本进行检测。最终能够利用多重PCR的方法检测到13个血清群中的12个血清群，其中除了血清群D以外。