[发明专利]一种链球菌重组亚单位疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种基因工程重组蛋白疫苗，具体地说，涉及一种预防猪链球菌病的基因工程重组亚单位疫苗。

背景技术

猪链球菌(Streptococcus suis)是一种重要的猪致病菌，目前已知的血清型有35个，其中血清2型(Streptococcus suis type 2，SS2)为全球范围的优势流行株，能够引发猪的急性败血症、脑膜炎、关节炎、支气管肺炎等疾病以及急性死亡；同时，SS2是一种重要的人畜共患传染病病原菌，并感染人，导致严重疾患甚至致死。

猪链球菌2型目前尚无用于临床的基因工程疫苗。本研究对猪链球菌某些免疫原性蛋白进行分析，将某个免疫原性蛋白基因进行表达或多个免疫原性蛋白基因进行串连表达，将获得的产物用于免疫预防。本发明通过串联表达猪链球菌2型的毒力因子溶菌酶释放蛋白(MRP)、甘油醛脱氢酶(GAPDH)以及新发现的膜蛋白吡啶二硫酸核苷酸氧化还原酶(HM6)，通过免疫攻毒保护试验研究其免疫原性和保护效果，探讨研制新一代亚单位疫苗的可能性。

溶菌酶释放蛋白(MRP)是猪链球菌2型菌体表面重要的菌体蛋白，分子量为136000，是该菌重要的保护性抗原，其结构和分布复杂(Smith Hilde E，Vecht Uri，Gielkens Arno L J，et al.Cloning and Nucleotide Sequence of the Gene Encoding the 136-KD Surface Protein (Muramidase-Released Protein)of Streptococcus suis Type 2.Infect Immun，1992，60：2361～2367)。

甘油醛脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)与黏附有关[Brassard，J.，M.Gottschalk，et al.(2004).″Cloning and purification of the Streptococcus suis serotype 2glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase and its involvement as an adhesin.″Vet Microbiol102(1-2)：87-94；Wang，K.and C.Lu(2007).″Adhesion activity of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase in a Chinese Streptococcus suis type 2strain.″Berl Munch Tierarztl Wochenschr120(5-6)：207-9。王楷宬(王楷宬.猪链球菌2型甘油醛脱氢酶的基因检测及其黏附作用[D].南京：南京农业大学，2006)在SS1、2、7、9中均检测到gapdh基因，而SS2无毒株T15则缺少该基因，并证实该蛋白具有免疫原性。

膜蛋白吡啶二硫酸核苷酸氧化还原酶(HM6)为张炜等[Zhang，W.and C.P.Lu(2007).″Immunoproteomic assay of membrane-associated proteins of Streptococcus suis type 2 Chinavaccine strain HA9801.″Zoonoses Public Health 54(6-7)：253-9]在2007年通过免疫蛋白组学的方发法筛选得到，是一种具有免疫原性的蛋白。

发明内容

本发明的目的在于通过串联表达猪链球菌2型的免疫原性蛋白，研制新一代亚单位疫苗。具体而言通过串联表达猪链球菌2型的3种免疫原性蛋白，即溶菌酶释放蛋白(MRP)、甘油醛脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)、吡啶二硫酸核苷酸氧化还原酶(HM6)。

本发明的另一个目的是提供一种编码本发明所述融合蛋白的基因。

本发明是通过以下技术方案实现的，在本发明中对猪链球菌2型的免疫原性蛋白MRP、GAPDH以及HM6进行原核表达，再将MRP与HM6进行串联原核表达，最终将GAPDH、MRP、HM6三者串联原核表达。

一方面，本发明提供了一种具有免疫原性的融合蛋白。在本发明的一个实例中，其中GAPDH片段位于该融合蛋白的氨基端，MRP片段位于该融合蛋白的中部，HM6片段位于该融合蛋白的羧基端，所述融合蛋白GAPDH-MRP-HM6具有SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列。