[发明专利]一种中压柱快速分离油茶饼粕中黄酮苷的制备方法

权利要求书

1.一种中压柱快速分离油茶饼粕中黄酮苷的制备方法，其特征在于由以下步骤组成：

第一步，脱脂：

油茶籽脱壳，籽破碎，采用石油醚、乙醚、正己烷、戊烷和正戊烷等有机溶剂脱脂，茶籽质量与有机溶剂的体积比例为1∶15-35g/mL，温度30℃-80℃，提取1-3h，提取1-4次，过滤后得到滤渣，得到脱脂的油茶籽粕；

第二步，提取：

将油茶籽粕以1g原料加入15-30mL的不同浓度醇-水溶液提取1-4次，提取温度60-80℃，提取时间1-3h，提取后，过滤，合并滤液，真空浓缩得到油茶粕黄酮苷粗提取物；

第三步，萃取：

将提取物得到的浸膏用正丁醇等有机溶剂萃取2-5次，将水层浓缩，得到粗提物；

第四步，中压柱纯化：

将油茶粕黄酮苷粗提取物与中压柱填料按质量比1∶15-50吸附，洗脱剂为氯仿、正丁醇、乙酸乙酯、甲醇、乙醇和水中的一种或几种的混合溶液，中压柱柱长20-300cm，柱直径2-30cm，柱压为3-20MPa，检测波长220-360nm，流速2-200mL/min，富集黄酮苷部位，室温真空回收溶剂，经HPLC分析，制备得到90％以上黄酮苷混合物；

第五步，HPLC制备分离：

以中压制备得到的90％以上的黄酮苷混合物为原料，采用高效液相进行制备，得到两种黄酮苷单体，分别为山奈酚3-O-[2-O-β-D-半乳糖-6-O-α-L-鼠李糖]-β-D-葡萄糖苷(Ⅰ)和山奈酚3-O-[2-O-β-D-木糖-6-O-α-L-鼠李糖]-β-D-葡萄糖苷(Ⅱ)，经HPLC分析，含量在95％以上。

2.根据权利要求1所述的一种中压柱快速分离油茶饼粕中黄酮苷的制备方法，其特征在于步骤2中的不同浓度的醇-水溶液为乙醇、甲醇和水中的一种或几种的混合溶液，优选60-90％的乙醇水溶液。

3.根据权利要求1所述的一种中压柱快速分离油茶饼粕中黄酮苷的制备方法，其特征在于步骤3中的有机溶剂为丙酮、乙酸乙酯和正丁醇或它们中的一种或者两种。

4.根据权利要求1所述的一种中压柱快速分离油茶饼粕中黄酮苷的制备方法，其特征在于中压柱填料可选择200-500目的硅胶和氧化铝中的一种或二种任意比，洗脱剂为氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和甲醇中的一种或几种的混合溶液，优选氯仿∶甲醇＝100∶1-30(v/v)混合溶剂。

5.根据权利要求1所述的一种中压柱快速分离油茶饼粕中黄酮苷的制备方法，其特征在于中压柱填料也可选择孔径为60A，40-60μm的ODS C18、C8和Sephedex LH-20材料，洗脱剂为甲醇、乙醇和水中的一种或几种的混合溶液，优选5％～50％的甲醇水溶液。

6.根据权利要求1所述的一种中压柱快速分离油茶饼粕中黄酮苷的制备方法，其特征在于高效液相制备的条件为：色谱柱XB-C18(Φ10mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇∶水＝2∶3(V/V)，紫外270nm，流速：3mL/min。

7.根据权利要求1所述的一种中压柱快速分离油茶饼粕中黄酮苷的制备方法，其特征在于HPLC分析条件为：色谱柱Hypersil ODS2(Φ4.6mm×200mm，5μm)；流动相：甲醇∶水＝4∶6(V/V)，紫外270nm，流速：1mL/min。