[发明专利]中压柱快速分离聚戊烯醇及其抗H3N2病毒注射剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗H₃N₂甲型流感病毒的聚戊烯醇注射剂的制备方法，尤其涉及聚戊烯醇抗病毒新药的开发。

背景技术

流感病毒分为甲、乙、丙三型。甲型流感病毒根据H和N抗原不同，又分为许多亚型，H可分为15个亚型(H₁～H₁₅)，N有9个亚型(N₁～N₉)。其中仅H₁N₁、H₂N₂、H₃N₂主要感染人类，其它许多亚型的自然宿主是多种禽类和动物。其中对禽类危害最大的为H₅、H₇和H₉亚型毒株，具有高致病性的H₅N₁、H₇N₇、H₉N₂等禽流感病毒，一旦发生变异而具有人与人的传播能力，会导致人间禽流感流行，预示着禽流感病毒对人类已具有很大的潜在威胁。目前防治流感病毒可采用流感疫苗，急需开发抗流感病毒新药。

聚戊烯醇类化合物广泛存在于被子植物、裸子植物、细菌、真菌及哺乳动物中。聚戊烯醇(polyprenols)是植物中天然的类脂化合物，以C₅异戊烯基为结构单元，由一系列异戊烯基单元组成的同系聚合物。研究表明，聚戊烯醇类化合物对人体无毒、无致突变、无致畸和无致癌作用，具有明显的生理、药理作用。生理学研究表明，聚戊烯醇对细胞膜的结构和功能具有调节作用，可改善膜的流动性、稳定性和渗透性，从而可增强膜的融合。外源性聚戊烯醇在体内可代谢为多萜醇，以补充体内多萜醇的不足，对提高免疫功能、肝细胞再生、抑制癌细胞转移和辅助放、化疗等具有明显作用，也可作为癌症病人的诊断剂。拉脱维亚等国已批准用于保健食品生产和药品开发，制备了“ROPREN”系列药物。而国内外对于聚戊烯醇用于保护H₃N₂甲型流感病毒的攻击新药开发还是空白。

对于聚戊烯醇新药的开发，分离纯化90％以上聚戊烯醇及其制剂的加工是关键。国内外对于植物聚戊烯醇的分离纯化已有文献报道，主要纯化路线是通过几次硅胶柱层析将聚戊烯醇粗提物纯度提高到90％以上。此外，还有一些其他纯化方法，如采用极性介质树脂(氧化铝或聚酰胺等)吸附，溶剂萃取和结晶，得到纯度为70％～75％的聚戊烯醇产品，得率1.0％左右。采用石油醚-乙酸乙酯冷冻脱杂后再进行硅胶柱层析纯化，制备纯度92.7％聚戊烯醇。但产品中仍含有大量的类胡萝卜素等黄色素，Tetsuo Takigawa等曾采用活性炭一种脱色剂对聚戊烯醇粗提物脱色，但活性炭用量大，脱色效果差，聚戊烯醇损失大。因此，传统的聚戊烯醇纯化路线存在明显缺点：繁琐、成本高、收率低，不适合工业化生产。

本专利以聚戊烯醇含量低于40％的植物脂溶性不皂化物为原料，采用活性炭与凹凸棒土作为混合脱色剂，脱色后的聚戊烯醇再经过中压柱层析分离，即获得90％以上聚戊烯醇，可用于保护H₃N₂甲型流感病毒攻击的新药开发。该方法与以往纯化方法相比，具有收率高、方便、经济、适合工业化生产等优点。

发明内容

本发明提出一种快捷简便、经济、适合工业化生产的纯化90％以上聚戊烯醇及其抗病毒作用注射剂的制备方法。

为实现上述目的，本发明一种中压柱快速分离聚戊烯醇及其抗H₃N₂病毒注射剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

第一步、植物脂溶性不皂化物冷冻

将聚戊烯醇含量低于40％的植物脂溶性不皂化物按固液比(g/mL)为1∶(1～10)溶解于特制的溶剂中，在-10℃至-40℃冷冻1～48h，-10℃至-20℃离心过滤，二次，合并上清液，室温真空回收溶剂，制备聚戊烯醇软膏；

第二步、脱色

将聚戊烯醇软膏按固液比(g/mL)为1∶(1～30)溶解于石油醚中，采用活性炭与凹凸棒土按质量比为1∶(3～8)作为脱色剂，聚戊烯醇软膏与脱色剂用量按质量比为(1～5)∶(1～5)，脱色温度50～120℃，脱色时间20～50min，过滤，二次，合并脱色清液，室温真空回收溶剂，制备脱色聚戊烯醇；

第三步、中压柱纯化