[发明专利]中压柱快速分离聚戊烯醇及其抗H3N2病毒注射剂的制备方法

权利要求书

1.一种中压柱快速分离聚戊烯醇及其抗H₃N₂病毒注射剂的制备方法，其特征在于由以下步骤组成：

第一步、植物脂溶性不皂化物冷冻

将聚戊烯醇含量低于40％的植物脂溶性不皂化物按固液比(g/mL)为1∶(1～10)溶解于特制的溶剂中，在-10℃至-40℃冷冻1～48h，-10℃至-20℃离心过滤，二次，合并上清液，室温真空回收溶剂，制备聚戊烯醇软膏；

第二步、脱色

将聚戊烯醇软膏按固液比(g/mL)为1∶(1～30)溶解于石油醚中，采用活性炭与凹凸棒土按质量比为1∶(3～8)作为脱色剂，聚戊烯醇软膏与脱色剂用量按质量比为(1～5)∶(1～5)，脱色温度50～120℃，脱色时间20～50min，过滤，二次，合并脱色清液，室温真空回收溶剂，制备脱色聚戊烯醇；

第三步、中压柱纯化

将脱色聚戊烯醇与中压柱填料按质量比1∶(15～50)吸附，洗脱剂为石油醚、乙酸乙酯、异丙醇和甲醇中的一种或几种的混合溶液，中压柱柱长20～300cm，柱直径2～30cm，柱压0.3～3MPa，检测波长199～230nm，流速2～200mL/min，富集聚戊烯醇部位，室温真空回收溶剂，制备90％以上聚戊烯醇；

第四步、制备抗H₃N₂甲型流感病毒制剂

5～10g 90％聚戊烯醇、3～5g卵磷脂、3～5g吐温-80、1～5g脱水山梨醇、10～20g丙二醇、100g去离子水，在室温下超声波乳化10～30min，4℃以下保存，使用前用去离子水稀释到所需浓度，搅拌均匀，制成聚戊烯醇注射剂。

2.根据权利要求1所述的一种中压柱快速分离聚戊烯醇及其抗H₃N₂病毒注射剂的制备方法，其特征在于第一步中植物脂溶性不皂化物来源于银杏、马尾松、黑松、湿地松、圆柏、雪松中的一种或两种以上任意配比的叶冠部位，经石油醚、正己烷、溶剂汽油非极性溶剂浸提，皂化，萃取等工艺处理，得到聚戊烯醇含量低于40％的软膏。

3.根据权利要求1所述的一种中压柱快速分离聚戊烯醇及其抗H₃N₂病毒注射剂的制备方法，其特征在于第一步特制的溶剂为正己烷∶乙酸乙酯∶丙酮＝1∶(5～10)∶(89～94)。

4.根据权利要求1所述的一种中压柱快速分离聚戊烯醇及其抗H₃N₂病毒注射剂的制备方法，其特征在于中压柱填料可选择200～500目的硅胶和氧化铝中的一种或二种任意比，洗脱剂为石油醚∶乙酸乙酯＝100∶(1～30)混合溶剂。

5.根据权利要求1所述的一种中压柱快速分离聚戊烯醇及其抗H₃N₂病毒注射剂的制备方法，其特征在于中压柱填料可选择5～25μODS C18和C8材料，流动相为异丙醇∶甲醇∶水＝(2～5)∶1∶(0.1～1)。

6.根据权利要求1所述的聚戊烯醇的脱色方法，其特征在于使用活性炭和凹凸棒土的混合脱色剂，通过正交试验确定的最佳脱色条件适用于聚戊烯醇任何纯化阶段的脱色。

7.根据权利要求1所述的聚戊烯醇含量分析，其特征在于利用HPLC外标法测定聚戊烯醇的纯度，色谱柱为Kromasil C18 ODS-1(5μm，150×4.6mm)，柱温为室温，紫外检测波长210nm，流动相为异丙醇∶甲醇＝38∶37，流速为1.0mL/min。

8.根据权利要求1所述的聚戊烯醇脱色率，其特征在于采用分光光度法，在451nm比色测定聚戊烯醇脱色率，聚戊烯醇脱色率＝[(A₀-A₁)/A₀]×100％，式中：A₀-聚戊烯醇脱色前的吸光度；A₁-聚戊烯醇脱色后的吸光度。