[发明专利]一种抗病毒融合蛋白及其应用

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种抗病毒融合蛋白——细胞穿膜肽-病毒巨噬细胞炎症蛋白(CPP-vMIP)及其在制备抗人类免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiency virus，HIV)的药物中的应用。

(二)背景技术

人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)是艾滋病(AIDS)的病原体，HIV/AIDS是人类面临最严重的全球性公共卫生问题之一。由于HIV-1病毒的高度变异、HIV直接攻击宿主免疫系统等原因，至今仍然没有有效的防治方法，尚没有有效的疫苗问世。

在艾滋病的治疗方面利用逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂(“鸡尾酒”疗法)具有强有力的拮抗病毒增殖的效果。“鸡尾酒”疗法能短暂降低体内病毒水平。此疗法虽可推迟艾滋病发病，但副作用很大，费用较高，患者难以坚持终身用药。

对病毒研究的进展发现了一些能够在HIV病毒复制的不同环节起抑制作用的基因，这些基因可以抑制病毒粘附宿主细胞、抑制病毒逆转录、复制和组装、释放等过程。最近的一些研究显示，胞嘧啶脱氨酶载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(apolipoprotein B mRNA-editingcatalytic polypeptide 3G，APOBEC3G)和APOBEC3F是体内最重要的内源性抗HIV因子。APOBEC家族均含有胞嘧啶脱氨酶活性结构域。A3G通过致使HIV发生突变抑制HIV的复制，在逆转录时使负链胞嘧啶(C)脱氨突变为尿嘧啶(U)。含有过多的U单链易于被尿嘧啶DNA糖苷酶识别并降解；过多的U也可以干扰正链合成的起始。负链中大量C→U的突变还可致正链DNA鸟嘌呤(G)突变为腺嘌呤(A)，使之不能编码有功能的病毒蛋白产物或提前终止产生截短的无功能蛋白。APOBEC3G主要通过抑制HBV前基因组RNA的包装和核衣壳化等方式来抑制HBV感染。

CC类趋化因子配体5(CC chemokine ligand 5，CCL5)，又被称为正常T细胞表达和分泌活性因子(RANTES)是HIV主要辅助受体CCR5的天然配体，能够与HIV竞争结合CCR5，抑制HIV-1粘附入侵宿主细胞。

细胞穿透肽(cell penetrating peptides，CPP)是近年来发现的一类能介导大分子物质跨膜转导的小分子肽段，CPP进入细胞能力不依赖经典的胞吞作用。人类已经发现了多种天然的CPP，同时根据细胞穿膜肽均为带有正电荷的长短不等的多肽片段，其中富含精氨酸、赖氨酸等碱性氨基酸残基，二级结构皆具有α-螺旋的空间构象等一些共有特性，目前已人工合成了穿透力更强、效率更高的穿膜肽PEP-1等。

中国专利申请，200810030223，公开了将包含细胞穿膜肽和APOBEC家族胞嘧啶脱氨酶结构域的融合蛋白及其在治疗HIV和HBV感染方面的应用。中国专利申请，99116283.8和00114299.2，公开了利用KSHV编码的vMIP及其衍生物在防治艾滋病药物中的应用。vMIP具有结合CCR5的功能，能够竞争抑制HIV利用该受体入侵宿主细胞，这两项专利均利用了vMIP的这一特点。目前还未有vMIP-II调控宿主免疫基因表达的报道。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种新型的融合蛋白，该融合蛋白能够以一种非受体、非能量依赖的方式进入细胞，有效提高细胞内抗病毒免疫基因表达水平，最终抑制HIV及HBV等病毒的感染。

本发明采用的技术方案是：

一种抗病毒融合蛋白，主要包括细胞穿膜肽结构域和病毒巨噬细胞炎症蛋白(vMIP)，所述细胞穿膜肽(CPP)结构域和病毒巨噬细胞炎症蛋白形成串联结构，所述病毒巨噬细胞炎症蛋白为下列之一或其中两种以上的组合：

(1)vMIP-I：MAPVHVLCCVSVLLATFYLTPTESAGSLVSYTPNSCCYGFQQHPPPVQILKEWYPTSPACPKPGVILLTKRGRQICADP SKNWVRQLMQRLPAIA；

(2)vMIP-II：MDTKGILLVAVLTALLCLQSGDTLGASWHRPDKCCLGYQKRPLPQVLLSSWYPTSQLCSKPGVIFLTKRGRQVCADKSKDWVKKLMQQLPVTAR；

(3)vMIP-III：

MWSMCWVLRAHLGLLFWVAVIELCAASGPATIMASDCCENSLSSARLPPDKLICGWYWTSTVYCRQKAVIFVTHSGRKVCGSPAKRRTRLLMEKHTEIPLAKRVALRAGKGLCP。