[发明专利]长双歧杆菌粘附抑制蛋白Aip在防治腹泻中的应用

权利要求书

1.一种长双歧杆菌粘附抑制蛋白Aip在防治腹泻中的应用，其特征是：粘附抑制蛋白Aip阻抑致病菌粘附定植于肠道，而不影响益生菌的粘附，从而防治致病菌引发的腹泻，维持肠道微生态平衡。

2.根据权利要求1所述的长双歧杆菌粘附抑制蛋白Aip在防治腹泻中的应用，其特征是所述的粘附抑制蛋白Aip的制备方法为：

(1)将新鲜培养的长双歧杆菌按1％接入300mL MRS液体培养基，37℃、厌氧培养16-18h，8000rpm离心3min，收集发酵液上清；

(2)分别按照15％和75％饱和度用硫酸铵分级沉淀上清，最后沉淀用20mLPBS重悬，脱盐，真空冷冻干燥；

(3)取1ml 0.5mg/ml的粗蛋白用预装离子柱Hitrap Q FF进行离子交换层析，首先用起始缓冲液平衡层析柱，所述的起始缓冲液为0.025mol/L磷酸钾缓冲液和0.001mol/L EDTA的混合物并调节pH为8.0，用洗脱缓冲液进行线性浓度梯度洗脱，流速为1ml/min，分别收集各洗脱峰，电泳检测，确定目的峰所在，所述的洗脱缓冲液为0.025mol/L磷酸钾缓冲液、1mol/L氯化钾和0.001mol/L EDTA的混合物并调节pH为8.0；

(4)收集的目的峰再用分子筛柱Hi trapSuperdex75进行分离，流动相为Millipore超纯水，流速为0.5ml/min，收集各流出峰，电泳检测，确定目的峰所在。