[发明专利]含EB病毒膜蛋白gp350/220、gp85、gp78、gp25基因的重组腺病毒疫苗

说明书

技术领域

本发明属于生物基因工程与生物医药领域，具体地，涉及含EB病毒膜蛋白gp350/220、gp85、gp78或gp25基因的复制缺陷型重组腺病毒及其制备方法、用含EB病毒糖蛋白gp350/220基因的复制缺陷型重组腺病毒载体转导的抗原提呈细胞，及含该抗原提呈细胞的疫苗组合物，也涉及该疫苗组合物在预防治疗鼻咽癌方面的用途。 

背景技术

EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)由Epstein与Barr与1964首次从非洲伯基特(Burkitt)淋巴瘤原代培养细胞中发现的。EB病毒是一种广泛存在于人群中的疱疹病毒(herpsvirus)，90％以上的人建立了EBV终身潜伏感染。EBV除直接导致传染性单核细胞增多症(infections mononucleosis，IM)外，还与人类几种常见的恶性肿瘤密切相关，如何杰金淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma，HL)、伯基特淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma，BL)、移植后淋巴组织增生性疾病(post-transplant lymphoproliferative disease)以及低分化的鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)密切相关。 

流行病学研究数据显示，NPC的发生具有明显的地区聚集性，主要发生于南亚、北非以及美国阿拉斯加的某些地区。尤其是中国的华南地区，鼻咽癌的发生率高达30-50/10000人每年。除了饮食习惯、环境、遗传等因素外，EBV在鼻咽癌的发生中起着重要的作用。 

开发预防性疫苗来控制EBV的概念最初由Epstein提出。由于EBV潜在的致癌特性，灭活或减毒疫苗是不可行的。以亚单位作为EBV疫苗的研究主要集 中在EBV的糖蛋白，包括gp350/220，gp85，gp25等。 

来源于B95.8的gp350含907个氨基酸，为高度糖基化蛋白，分子量为350kd，由于mRNA的剪切方式不同，可在aa500-697的位置剪切掉一段高度重复的序列，得到分子量为220kd的蛋白，故称为gp350/220。EB病毒gp350是EBV外膜蛋白中含量最高的蛋白，在EBV侵入CD21阳性细胞(如B淋巴细胞)时起着重要的作用。EBV通过gp350与B淋巴细胞表面受体CD21相互作用介导EBV进入细胞内。 

许多研究成果已经证明gp350可作为潜在的预防EBV的疫苗。1982年North等提取天然的EBV外膜蛋白gp350，免疫小鼠可得到保护性中和抗体。然而提取天然gp350的产量毕竟有限，不易规模化。1985年，Mackett等将gp350的全长基因克隆到痘病毒，在痘病毒启动子的作用下，gp350蛋白得到有效表达。将重组痘病毒免疫新西兰兔，免疫血清可以中和EBV感染B淋巴细胞。随后，gp350在多种疫苗载体中重组，包括复制缺陷型腺病毒载体，质粒以及牛疱疹病毒等。Ragot等将gp350复制缺陷型腺病毒重组子免疫棉顶猴，尽管免疫血清在体外不能中和EBV，但都能保护免疫的动物免于在致瘤量的EBV作用下诱导淋巴瘤。然而其他的研究者发现无论是gp350的重组质粒还是重组病毒，免疫血清不但具有体外中和功能，还有保护动物免于致瘤的功能。由葛兰素史克公司进行的gp350亚单位疫苗二期临床实验结果显示，该疫苗能有效防止EBV引起的感染性单核苷酸增多综合症。 

糖蛋白gp85、gp25是以复合物的形式存在，与gp42一起形成三聚体，与EBV感染宿主细胞膜融合相关。研究表明gp85/gp25复合物在体外可以封闭EBV感染上皮细胞。针对gp85/gp25复合物的抗体可以中和EBV对上皮细胞的感染。对于gp78的研究较少，研究发现gp78的抗体水平与鼻咽癌的发生、发展密切相关，提示gp78可作为潜在的EBV靶抗原。 

由于EBV是鼻咽癌发生(尤其是鼻咽癌高发地区)的重要诱因之一，因此本发明旨在开发针对鼻咽癌的EBV的疫苗。 

发明内容