[发明专利]一种分离环磷腺苷的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种分离环磷腺苷的方法。 

背景技术

环磷腺苷又名3′，5′-环磷酸腺苷(3′，5′-cyclic adenosine monophosphate，简称cAMP)，为蛋白激酶致活剂，是核苷酸的衍生物。它是在人体内广泛存在的一种具有生理活性的重要物质，由三磷酸腺苷在腺苷环化酶催化下生成，能调节细胞的多种功能活动。作为激素的第二信使，在细胞内发挥激素调节生理机能和物质代谢的作用，能改变细胞膜的功能，促使网织肌浆质内的钙离子进入肌纤维，从而增强心肌收缩，并可促进呼吸链氧化酶的活性，改善心肌缺氧，缓解冠心病症状及改善心电图。此外，对糖、脂肪代谢、核酸、蛋白质的合成调节等起着重要的作用。 

关于cAMP的分离纯化，国内外报道的较少，传统的分离工艺普遍存在着工艺冗长、产量收率低，分离成本高，环境污染性大等缺点。如2000年出版的《最新生化药物制备技术》报道：在化学合成的环磷腺苷结晶工艺，分离段所使用的是阳离子交换剂，吸附能力较低，分离纯化效果不佳。 

发明内容

因此，本发明的目的是克服现有技术中使用阳离子交换树脂分离环磷腺苷的方法吸附容量小、分离纯化效果不佳的问题，提供一种吸附容量大、分离纯化效果好的分离环磷腺苷的方法。 

本发明提供了一种分离环磷腺苷的方法，该方法包括用阴离子交换柱吸附环磷腺苷溶液；将碱性溶液作为洗杂剂对吸附后的阴离子交换柱进行洗杂；然后将酸性溶液作为洗脱剂对该阴离子交换柱进行洗脱。 

根据本发明提供的方法，其中，所述阴离子交换柱所填充的树脂是(C2-C4)羟烷化苯乙烯-二乙烯苯共聚得到的亲水性树脂，功能性基团可以为仲胺、叔胺或季铵基团，这些树脂的代表性的例子包括Amberlite IRA93(功能性基团为仲胺基团)、Amberlite IRA95(功能性基团为叔胺基团)和Amberlite IRA900RF Cl(功能性基团为季铵基团)；该功能性基团可以优选为叔胺基团，这类树脂的代表性的例子为Amberlite IRA95。 

其中，所述阴离子交换树脂的比表面积可以为600-700m²/g，优选为620-680m²/g；所述阴离子交换柱的内部可交换基团容量可以为1.3-2mep/g湿树脂，优选为1.3-1.6mep/g湿树脂；所述阴离子交换柱的树脂填充量可以为每克湿离子交换树脂吸附0.08-0.15g环磷腺苷，优选为每克湿离子交换树脂吸附0.085-0.135g环磷腺苷。 

所述功能性基团可以表示为-R-Z，其中R可以为C2-C4的烯烃链，且选择性地对其中一个碳原子进行羟基化；Z可以表示为-NH₂、-NR₁R₂或-NR₁R₂R₃⁺OH^-或其盐，其中R₁、R₂、R₃分别为C1-C4烷基链，且选择性对碳原子进行羟基化。因此所述功能性基团的结构式可以表示为-R-NH₂(例如Amberlite IRA93)，-R-NR₁R₂(例如Amberlite IRA95)或-R-NR₁R₂R₃⁺OH^-或其盐(例如Amberlite IRA900RF Cl)。 

根据本发明提供的分离环磷腺苷的方法，其中，所述碱性溶液可以优选为0.001-2摩/升(更优选为0.01-1.2摩/升)的氨水、氢氧化钠溶液和氢氧化钾水溶液中的一种或多种；所述酸性溶液可以优选为0.001-2摩/升(更优选为0.01-1.2摩/升)的盐酸、硫酸和磷酸水溶液中的一种或多种。 

由于本发明的可以将环磷腺苷与某些理化特性与其相似的化合物分离开，因此本发明的方法对所述环磷腺苷溶液中含有的环磷腺苷的浓度没有特别的限定，一般地，使用本发明的方法分离的环磷腺苷溶液中含有的环磷腺苷的浓度可以为5-20克/升，优选为5-15克/升，更优选为优选5-10克/升；该环磷腺苷溶液的pH值可以为6-11，优选为7-9。