[发明专利]一种西索霉素高产菌种遗传改良的方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种微生物遗传改良的方法，尤其涉及一种西索霉素高产菌种遗传改良的方法。

【背景技术】

氨基糖苷类抗生素具有水溶性好，性质稳定，抗菌谱广，抗菌杀菌能力强，吸收排泄良好，与β-内酰胺类联合有协同作用等特点，自问世以来一直是临床上重要的抗感染药物，尤其是作为治疗革兰氏阴性菌感染和结核病不可缺少的药物。由于此类抗生素存在不同程度的耳、肾毒副作用，以及长期使用所出现的耐药情况，使人们不断致力于研制一些对钝化酶稳定，对产酶菌、耐药菌具良好抗菌作用，且耳、肾毒性较低的氨基糖苷类新品种。

西索霉素为小单孢菌产生的氨基糖甙类抗生素，属于碱性水溶性物质，其硫酸盐，为白色有黄白色结晶性粉末，有引湿性，迅速溶于水，几乎不溶于乙醇，溶液有右旋性。抗菌谱与庆大霉素近似，对金葡球和大肠杆菌、克霉白杆菌、变形杆菌、肠杆菌、绿脓杆菌、痢疾杆菌等革兰阴性有效。对绿脓杆菌的抗菌作用，比庆大霉素强与妥布毒素近似。对沙雷杆菌的作用，低于庆大霉素，但高于妥布霉素。

为了进一步提高西索霉素生产菌种的发酵单位，提高产量、有效组分，及改善产品质量，首先要从菌种工作做起，开展小单孢菌的遗传选育。由于小单孢菌生长缓慢、细胞壁的结构特殊，对物理、化学诱变剂耐受性强，遗传稳定性好，不易引起遗传变异。因此必须采用一种有效的诱变手段，才能达到良好的诱变效果。

离子注入技术作为一种新型诱变手段具有跟常规物理化学诱变方法不同的地方。离子注入对生物体的作用具有能量沉积、质量沉积、动量传递和电荷中和与交换的四种作用。能量沉积不仅像其他电离辐射一样能导致生物体的直接损伤和间接损伤，而且还具有更高的线性能量转移值(LET)和尖锐的电离峰(Bragg峰)；质量沉积能引起细胞内生物大分子的移位和重排，并可生成新的产物；动量传递可导致细胞表面溅射，并像手术刀一样对细胞表面进行刻蚀与加工，使细胞表面产生许多的微孔和洞；电荷中和与交换可以导致细胞表面电性的变化而改变细胞的跨膜物理磁场，从而影响细胞的内外能量转换、物质运输、信息传递等生物学过程。因此离子注入技术用于诱变育种有可能在损伤较轻的情况下获得较高的突变率和较宽的突变谱。

【发明内容】

本发明所要解决的技术问题在于提供一种西索霉素高产菌种遗传改良的方法，能够有效的提高了西索霉素的产量。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：一种西索霉素高产菌种遗传改良的方法，将涂布有稀释好的伊尼奥小单孢菌菌悬液的培养皿置于真空度为10^-3Pa的离子注入机靶室的靶台上；接着对培养皿上的菌膜进行离子注入诱变，该离子注入的离子源以5s脉冲式注入，且间隔15s、注入的剂量为50×10¹³ions/cm²～200×10¹³ions/cm²；然后取出培养皿用无菌水洗脱，梯度稀释涂布于分离平皿，于34℃培养10天左右，用于单菌落的筛选，以摇瓶发酵西索霉素的效价为标准，挑取高产菌株；经过反复多轮离子注入诱变选育，获得一株效价达到1700u/ml左右的西索霉素高产菌株。

进一步地，所述离子源为20KeV的氮离子。

本发明一种西索霉素高产菌种遗传改良的方法的有益效果在于：诱变获得的伊尼奥小单孢菌，与原始菌株相比，发酵效价提高了90％，利用该诱变获得的伊尼奥小单孢菌对西索霉素进行选育，最终得到一株效价达到1700u/ml左右的西索霉素高产菌株，进而有效的提高了西索霉素的产量。

【具体实施方式】

本发明一种西索霉素高产菌种遗传改良的方法，将涂布有培养稀释好的伊尼奥小单孢菌悬液的培养皿置于真空度为10^-3Pa的离子注入机靶室的靶台上；接着对培养皿上的菌膜进行离子注入诱变，该离子注入的离子源以5s脉冲式注入，且间隔15s，且每轮离子注入的剂量不同时，每轮诱变获得的伊尼奥小单孢菌对西索霉素进行选育所得西索霉素菌株的效价均有差异。

实施例