[发明专利]一种新的肿瘤树突状细胞治疗性疫苗的制备方法及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物学和医学领域，更具体地涉及一种新型高效树突状细胞肿瘤治疗性疫苗的制备方法以及该类疫苗在各类肿瘤治疗预防中的应用。

背景技术

肿瘤的主动性免疫治疗是治疗及预防肿瘤或感染性疾病的有效手段，自从人类采用接种牛痘预防天花以来，人类在感染性疾病的预防及控制上取得了很大的进展，目前在我国已经基本消灭了天花、脊髓灰质炎等感染性疾病，但在其他重大疾病的治疗方面如肿瘤等疾病的预防及治疗方面，仍然缺乏有效的手段。

肿瘤的免疫治疗是继手术、放疗、化疗之后的一个新的治疗模式，肿瘤免疫治疗的中心环节就是诱导机体产生特异性和非特异性的抗肿瘤免疫。采用肿瘤疫苗去诱导特异性的抗肿瘤免疫，对于抑制肿瘤的生长及转移更为重要，目前尽管已知一些肿瘤抗原，但对于大多数肿瘤来说，肿瘤抗原仍是未知的。目前常用的肿瘤疫苗包括采用全细胞瘤苗、肿瘤细胞的裂解物、肿瘤抗原致敏的树突状细胞瘤苗、基因工程疫苗等，取得了一定的疗效，但也明显存在不足。

1.肿瘤相关抗原肽疫苗。目前人类已经获得了四类肿瘤相关抗原，(1)肿瘤特异性抗原，包括MAGE-1、MAGE-3、GAGE、RAGE等，这类抗原在正常组织除了睾丸和胎盘外不表达，只在肿瘤细胞中表达；(2)肿瘤分化抗原，包括MART-1、gp-100、酪氨酸激酶相关蛋白-1，分布于黑色素细胞瘤；(3)突变基因编码蛋白，如MUM-1等这些基因分布广泛，但在肿瘤组织中突变而成为肿瘤抗原；(4)在肿瘤组织高表达的一类抗原，如HER2-neu等。目前采用合成抗原肽或基因工程表达及DNA疫苗的方式制备该类疫苗。

2.树突状细胞瘤苗。树突状细胞是体内最强的专职性抗原递呈细胞，是抗肿瘤免疫应答的始作俑者，采用肿瘤细胞裂解物或肿瘤相关抗原肽致敏树突状细胞回输体内，可以诱导抗原特异性的免疫应答，目前该类疗法已经进入临床Ⅰ-Ⅲ期试验

3.抗独特型抗体疫苗。抗独特型抗体可以模仿蛋白和抗原肽，在部分试验中人们已经可以应用抗独特型抗体诱导针对肿瘤相关抗原的特异性的免疫反应，该类疫苗的优势在于可以产生比抗原肽更强的免疫应答。

4.基因修饰的肿瘤疫苗。采用病毒或基因修饰肿瘤细胞作为瘤苗是研究较多的一类肿瘤疫苗，主要是采用细胞因子基因、共刺激分子等、希望提高肿瘤细胞的免疫原性，诱导抗肿瘤免疫应答。

然而，目前以上4种肿瘤疫苗均存在明显不足，许多肿瘤抗原不明确，无法诱导肿瘤特异性的CTL，而采用树突状细胞瘤苗和基因修饰的肿瘤细胞瘤苗，也存在体外操作复杂、质量难以控制、疗效有限等因素。

因此，本领域迫切需要开发新的疗效好、操作简便的新肿瘤疫苗。

发明内容

本发明的目的就是提供一种高效的用于肿瘤治疗及预防的疫苗成分，该疫苗成分是采用细胞经化疗药物5-FU后的含肿瘤抗原的上清液；

本发明的另一目的是提供所述含肿瘤抗原的上清液的制法及用途。

在本发明的第一方面，提供了一种含肿瘤抗原的上清液，所述的上清液是由肿瘤细胞经化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导培养后的，经离心去除肿瘤细胞和固态杂质后获得的上清液，并且所述的上清液具有以下特征：

(a)包含以下免疫刺激分子：HMGB1；

(b)含有选自下组的免疫分子：肿瘤抗原、MHC分子、粘附分子或共刺激分子；和

(c)含有热休克蛋白分子。

在另一优选例中，所述的上清液还具有以下特性：

(d)可以刺激树突状细胞分泌选自下组的细胞因子和趋化因子：IL-1β、IL-12、TNF-α和MIP-1α(CCL3)、MIP-3β(CCL19)和IP-10(CXCL10)；

(e)所述的含肿瘤抗原的上清液在体外可以趋化和激活树突状细胞、T细胞，诱导抗原特异性和非特异性的免疫应答反应。

在另一优选例中，所述的上清液是用如下方法制备的：

(a)将所述的肿瘤细胞在37±3℃下用化疗药物5-FU诱导培养0.5-48小时，获得培养液；和

(b)对步骤(a)的培养液进行离心，从而获得培养上清。

在另一优选例中，所述的肿瘤细胞是选自下组肿瘤的细胞：肺癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、食管癌、胰腺癌、结直肠癌、黑色素瘤、肾癌、前列腺癌、恶性淋巴瘤、白血病、宫颈癌、卵巢癌、鼻咽癌、口腔癌、骨肉瘤、脑胶质瘤、膀胱癌、多发性骨髓瘤。

在本发明的第二方面，提供了一种致敏的树突状细胞，所述的树突状细胞是用本发明第一方面中所述的含肿瘤抗原的上清液致敏的。

在另一优选例中，所述的致敏的树突状细胞具有以下特性：