[发明专利]一种新的肿瘤树突状细胞治疗性疫苗的制备方法及其用途

权利要求书

1.一种含肿瘤抗原的上清液，其特征在于，所述的上清液是由肿瘤细胞经化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导培养后的，经离心去除肿瘤细胞和固态杂质后获得的上清液，并且所述的上清液具有以下特征：

(a)包含以下免疫刺激分子：HMGB1；

(b)含有选自下组的免疫分子：肿瘤抗原、MHC分子、粘附分子或共刺激分子；和

(c)含有热休克蛋白分子。

2.如权利要求1所述的含肿瘤抗原的上清液，其特征在于，所述的上清液还具有以下特性：

(d)可以刺激树突状细胞分泌选自下组的细胞因子和趋化因子：IL-1β、IL-12、TNF-α和MIP-1α(CCL3)、MIP-3β(CCL19)和IP-10(CXCL10)；

(e)所述的含肿瘤抗原的上清液在体外可以趋化和激活树突状细胞、T细胞，诱导抗原特异性和非特异性的免疫应答反应。

3.如权利要求1所述的含肿瘤抗原的上清液，其特征在于，是用如下方法制备的：

(a)将所述的肿瘤细胞在37±3℃下用化疗药物5-FU诱导培养0.5-48小时，获得培养液；和

(b)对步骤(a)的培养液进行离心，从而获得培养上清。

4.如权利要求1所述的含肿瘤抗原的上清液，其特征在于，所述的肿瘤细胞是选自下组肿瘤的细胞：肺癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、食管癌、胰腺癌、结直肠癌、黑色素瘤、肾癌、前列腺癌、恶性淋巴瘤、白血病、宫颈癌、卵巢癌、鼻咽癌、口腔癌、骨肉瘤、脑胶质瘤、膀胱癌、多发性骨髓瘤。

5.一种致敏的树突状细胞，其特征在于，所述的树突状细胞是用权利要求1所述的含肿瘤抗原的上清液致敏的。

6.如权利要求5所述的致敏的树突状细胞，其特征在于，所述的致敏的树突状细胞具有以下特性：

(i)分泌选自下组的细胞因子和趋化因子：IL-1β、IL-12、TNF-α和MIP-1α(CCL3)、MIP-3β(CCL19)和IP-10(CXCL10)；

(ii)分泌MHC II分子HLA-DR；

(iii)分泌共刺激分子CD80，CD86；

(iv)刺激同种异体的T细胞增殖。

7.一种药物组合物，其特征在于，含有有效量的权利要求5所述的致敏的树突状细胞，和药学上可接受的载体。

8.一种制备含肿瘤抗原的上清液的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)将所述的肿瘤细胞在37±3℃下用化疗药物5-FU诱导培养0.5-48小时，获得培养液；和

(b)对步骤(a)的培养液进行离心，从而获得培养上清。

9.一种制备权利要求5所述的致敏的树突状细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

用权利要求1所述的含肿瘤抗原的上清液，按50μg/ml(建议改为50μg/10⁶个细胞)树突状细胞的剂量致敏树突状细胞，从而获得致敏的树突状细胞。

10.如权利要求1所述的含肿瘤抗原的上清液或权利要求5所述的致敏的树突状细胞的用途，其特征在于，用于制备预防或治疗肿瘤药物。