[发明专利]一种L-门冬酰胺酶的制备方法无效
| 申请号： | 201010176205.7 | 申请日： | 2010-05-11 |
| 公开（公告）号： | CN101831417A | 公开（公告）日： | 2010-09-15 |
| 发明（设计）人： | 明飞平;黄乐天;梁淑娃;夏枫耿;蓝碧峰;谭颖嫦;谢鹏 | 申请（专利权）人： | 广州市微生物研究所 |
| 主分类号： | C12N9/82 | 分类号： | C12N9/82;C12R1/18 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 陈卫 |
| 地址： | 510663 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 门冬酰胺酶 制备 方法 | ||
1.一种L-门冬酰胺酶的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)取欧文氏菌菌体，加入磷酸二氢钠抽提液，调节pH值至4.8～5.2，经搅拌、离心收取上清液；
(2)将上清液过滤，通过阳离子交换层析柱进行吸附层析；
(3)用缓冲液洗脱；
(4)将洗脱液过滤，通过亲和层析柱进行吸附层析；
(5)用缓冲液洗脱，得到L-门冬酰胺酶。
2.根据权利要求1所述的L-门冬酰胺酶的制备方法，其特征在于步骤(1)中，所述磷酸二氢钠抽提液是溶菌酶含量为0.2mg/ml的50mmol/L的磷酸二氢钠缓冲液。
3.根据权利要求1所述的L-门冬酰胺酶的制备方法，其特征在于步骤(1)中，所述搅拌的时间为20～30min。
4.根据权利要求1所述的L-门冬酰胺酶的制备方法，其特征在于步骤(2)中，所述过滤是经1.2μm滤膜过滤，过滤后的上清液以50ml/min的速度流经被平衡好的阳离子交换层析柱中吸附。
5.根据权利要求1或4所述的L-门冬酰胺酶的制备方法，其特征在于步骤(2)中，所述阳离子交换层析柱是CM-纤维素阳离子交换层析柱。
6.根据权利要求1所述的L-门冬酰胺酶的制备方法，其特征在于步骤(3)中所述用缓冲液洗脱方法如下：用pH为7.0的50mmol/L磷酸二氢钠缓冲液洗涤阳离子交换层析柱凝胶，至洗脱液OD280＜0.1时，更换洗脱液为pH为8.8的100mmol/L磷酸二氢钠缓冲液洗脱，收集OD280＞0.1的洗脱液。
7.根据权利要求1所述的L-门冬酰胺酶的制备方法，其特征在于步骤(4)中，所述过滤是经0.2μm滤膜过滤，过滤后以50ml/min的速度流经平衡好的亲和层析柱中吸附。
8.根据权利要求1或7所述的L-门冬酰胺酶的制备方法，其特征在于步骤(4)中，所述亲和层析柱为DEAE-Sephadex亲和层析柱。
9.根据权利要求1所述的L-门冬酰胺酶的制备方法，其特征在于步骤(5)中所述用缓冲液洗脱方法如下：用pH为7.0的50mmol/L磷酸二氢钠缓冲液洗涤亲和层析柱凝胶，至洗脱液OD280＜0.1时，更换洗脱液为pH为8.8的100mmol/L磷酸二氢钠缓冲液，洗脱收集OD280＞0.1的洗脱液。
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