[发明专利]一种基因重组人Cu-Zn超氧化物歧化酶脂质体肠溶胶囊及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属生物技术领域，涉及基因重组人铜-锌超氧化物歧化酶(Cu-ZnSOD)脂质体肠溶胶囊及其制备方法，特别涉及重组人铜-锌超氧化物歧化酶的脂质体包埋技术及肠溶胶囊制备方法。

背景技术

目前，人们认为自由基(也称游离基)与大部分疾病以及人体的衰老有关。所谓自由基就是当机体进行代谢时，能夺去氧的一个电子，这样这个氧原子就变成自由基。自由基很不稳定，它要在身体组织细胞的分子中再夺取电子来使自己配对，使被夺去电子的分子也变成自由基。自由基有多种，如超氧化物阴离子自由基、羟自由基、氢自由基和甲基自由基等。由于自由基非常活泼，化学反应性极强，参与一系列的连锁反应，能引起生物细胞膜上的脂质过氧化，破坏膜的结构和功能。自由基也可以引起蛋白质变性和交联，使体内的许多酶及激素失去生物活性，降低机体的免疫能力、神经反射能力、运动能力等，同时还能破坏核酸结构和导致整个机体代谢失常，最终使机体发生病变。因此，自由基作为人体垃圾，是促使某些疾病发生和机体衰老的根本原因。

虽然自由基会对机体产生诸多危害，但是在一般的条件下人体细胞内也存在着清除自由基、抑制自由基反应的体系，它们有的属于抗氧化酶类，有的属于抗氧化剂。超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)是一种主要的抗氧化酶，能清除超氧化物自由基，在防御氧的毒性、抑制老年疾病以及预防衰老等方面起着重要作用。

SOD能专一地清除体内有害的自由基，以解除自由基氧化体内的某些组成成分而造成的机体损害，如氧中毒、急性炎症、水肿、自身免疫性疾病、辐射病等。实验证明，SOD解毒反应过程主要分两步：第一步是作为有害物质的超氧阴离子在SOD的作用下和氢离子反应，生成另一种物质-过氧化氢；第二步是，过氧化氢又在过氧化氢酶的作用下和氢反应，最终生成了一种对人体无害的物质-水。

超氧化物歧化酶(SOD)是目前临床上常用的治疗药物，可以制成SOD注射剂、SOD口服液、SOD胶囊等。SOD注射剂采用直接注射给药的方式，避免了药物在胃肠道中被强酸和蛋白酶的降解，因此作用显著，但缺点在于需要注射给药，给患者带来痛苦；SOD口服液和SOD胶囊采用口服给药，患者容易接受，但是由于SOD在消化系统中有较大的破坏，因此大大影响其效果。本发明正是针对该问题，提出了采用脂质体包埋技术，制备SOD脂质体肠溶胶囊，大大提高了SOD的吸收率，延长了SOD在体内的半衰期。

另一方面，目前国内生产的SOD主要为猪血或牛血中提取SOD制品，存在着含量低、提取成本高、原料不足等问题，而微生物发酵生产SOD的研究报道较少，如在申请号01106224.X，申请日2001年02月27日的“SOD乳酸菌生产技术”，乳酸菌表达机制复杂，营养物质的利用力低，产SOD量有限；代谢产乳酸易使培养环境的pH降低，影响SOD酶活力。期刊号CNKI:SUN:WSWX.0.1999-01-002的“酵母菌中超氧化物歧化酶的研究”，是通过筛选自身高表达超氧化物歧化酶的酵母为主的发酵提纯技术。酵母自身产超氧化物歧化酶受自身机制调控，限定在一个较窄的范围内；细胞内提取中杂蛋白较多，工艺复杂，提取过程酶损失较大，酶活的影响也较大。基因工程发酵生产SOD的研究报道更少，如申请号97103939.9的“重组人源铜-锌超氧化物歧化酶制备工艺”，工程菌表达的重组人铜-锌超氧化物歧化酶为包涵体形式存在，纯化过程中采用超声破碎菌体，有机溶剂洗涤，这些过程会有大量目的蛋白损失，而复性难度也较大，酶活较低。采用基因工程技术生产重组人铜-锌SOD，再采用脂质体包埋技术制备重组人铜-锌超氧化物歧化酶(Cu-Zn SOD)脂质体肠溶胶囊则未见报道。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种采用基因工程技术制备人铜-锌超氧化物歧化酶(Cu-Zn SOD)的方法，保持其应有的活性。

本发明的第二个目的在于提供一种采用脂质体包埋技术，将上述人铜-锌超氧化物歧化酶进行包埋，以提高其在人体中的吸收率。

本发明的第三个目的在于提供一种含有上述人铜-锌超氧化物岐化酶脂质体肠溶胶囊的保健食品。

本发明的第一个目的通过以下工艺步骤实现：

1、分泌表达重组人铜-锌超氧化物歧化酶(Cu-Zn SOD)的毕赤酵母菌种的构建：对人铜-锌超氧化物歧化酶进行基因测序，并对基因序列进行密码子优化，优化后的序列为：

ATGGCTACTAAAGCTGTTTGTGTTTTGAAGGGTGATGGTCCAGTTCAAGGT