[发明专利]一种抗体保护剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗体保护剂及其应用，属于生物检测技术领域。

背景技术

离子液体是指在室温范围内(一般为100℃下)呈现液态的完全由离子构成的物质体系。一般由有机阳离子和无机阴离子、有机阴离子组成，其性能主要由组成的阳离子和阴离子共同决定。离子液体具有很多独特的理化性能，经测定，许多咪唑阳离子构成的离子液体的热分解温度高达400℃。由于离子液体的熔点一般低于100℃，因此其稳定的液态范围可达300℃-400℃，这是普通溶剂无法比拟的。与传统的有机溶剂不同，由于离子液体内部的库仑引力较大，相当于水的10倍，其蒸汽压几乎察觉不到。离子液体随其阴离子和阳离子的不同呈现出一定的极性，对金属络合物具有很强的溶解能力，对于普通溶剂难以溶解的氢化物(NaH、CaH 2)、碳化物、氮化物、硫化物以及各种氧化物的盐类化合物，离子液体也具有良好的溶解能力。

由于离子液体所体现的优良特性，在诸多领域越来越成为研究的热点，如离子液体在萃取分离、有机合成反应、环境友好催化体系中的应用，因此，被认为是一种具有广阔应用前景的新型环境友好的绿色溶剂。有关离子液体与酶之间相互作用报道已有很多，例如，酶在室温离子液体里的活性、稳定性、选择性等等，但是，国内外有关离子液体在抗体稳定性方面的研究却未见报道。目前，常用小分子糖类物质、表面活性剂等作为抗体保护剂，但效果并不理想。

发明内容

本发明提供了一种抗体保护剂，可在室温下保持抗体的稳定。

为解决上述技术问题，含有离子液体1-仲丁基-3-甲基咪唑-六氟磷酸盐、牛血清蛋白、硫柳汞，pH为7.4的PBS缓冲液；其中1-仲丁基-3-甲基咪唑-六氟磷酸盐浓度为0.05％-5％、牛血清蛋白含量为0.1g/L-3g/L、硫柳汞含量为0.05g/L-1g/L。

所述抗体保护剂，还包括浓度为10mmol/L-30mmol/L的CaCl₂，浓度为200mmol/L-600mmol/L的海藻糖。

所述抗体保护剂，离子液体1-仲丁基-3-甲基咪唑-六氟磷酸盐(离子液体1-仲丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐的微波辅助合成、晶体结构及热稳定性，高等学校化学学报，2009，9，1814-1818)在抗体保护剂中其浓度为0.05％-5％(体积比)，其优选浓度为0.5％；发明所用离子液体为自主合成；在装有电动搅拌器、温度计和高纯氮气的四口瓶中，加入等摩尔(0.5mL)的3-甲基咪唑和重蒸过的溴代仲丁烷，水浴加热，溶液由透明变为膏状时停止搅拌，加水溶解，弃去上层未反应的原料，将中间产物转移至400mL烧杯中加入200mL丙酮，搅拌，分批加入四氟硼酸钾，加毕，继续搅拌3h，过滤除溴化钾，滤液减压蒸馏除去丙酮，得到无色离子液体，然后，采用红外、紫外、核磁(1H-NMR)和电喷雾质谱对离子液体进行表征。

所述的pH缓冲液，采用PBS缓冲液，由磷酸一氢钠、磷酸二氢钠、氯化钠组成，30-40℃水浴溶解后，冷却至室温，校正pH至7.4。

所述硫柳汞、CaCl₂、海藻糖为常用防腐剂的成分。

本发明提供的一种抗体保护剂，用于提高免疫学检测的稳定性。

为解决上述技术问题，本发明应用方法为，抗体保护剂与抗体按照1∶1-3∶1之间的比例混合，混合后的复合物包被于裸金电极表面制作成为工作电极，工作电极用于免疫学检测。

所述工作电极的制备方法为，金电极(直径2mm)分别经0.3、0.05μm Al₂O₃悬浊液抛光成镜面后，依次用蒸馏水、无水乙醇、蒸馏水超声5min，清洗后将电极置于室温下晾干备用；将一定量的羧基化碳纳米管滴加于电极表面，于室温下晾干备用；将上述抗体混合液10μL滴于电极表面，在37℃下吸附1h，蒸馏水洗净晾干，在4℃下储存备用。

所述免疫学检测装置工作原理在于，抗体包被于电极表面产生一定阻抗值，抗体与检测物中毒素结合后阻抗值发生变化，其变化与毒素浓度成正比，装置采用CHI760C型电化学工作站检测阻抗值。

所述CHI760C型电化学工作站，其本质是用于控制和监测电化学池电流和电位以及其它电化学参数变化的仪器装置，本发明用于检测阻抗值的变化。

所述抗体，为黄曲霉毒素抗体、金黄色葡萄球菌B型肠毒素抗体、藻毒素抗体或呕吐毒素抗体中任一一种，购自Sigma公司。

所述毒素，为黄曲霉毒素、金黄色葡萄球菌B型肠毒素、藻毒素和呕吐毒素中任一一种，购自Sigma公司。