[发明专利]一种水母毒素去溶血毒性的方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，是一种水母毒素去溶血毒性的方法。

背景技术

水母毒素是一类结构新颖、毒性极强的肽类毒素，具有心血管、 溶血、神经、呼吸等多种生物活性。由于水母毒素具有温度敏感、不 稳定、易粘附、易失活等特点，其毒性成分的纯化与鉴定工作进展缓 慢，总体上滞后于其他常见生物毒素。

水母毒素心血管毒性和溶血毒性在水母蜇伤中毒中发挥重要作 用，也是水母毒素中研究报道最多的两类毒性组分。其中心血管毒性 组分丰度较低，但造成的心血管功能损伤是水母毒素致死的主要原因 (Xiao L，Liu GS，Wang QQ，et al.，The lethality of tentacle-only extract  from jellyfish Cyanea capillata is primarily attributed to cardiotoxicity in  anaesthetized SD rats[J].Toxicon.2010，55(4)：838-845)。溶血毒性组分 丰度较高，溶血会造成血钾升高，对损伤心血管功能可能起协同作用 (Xiao L，Zhang J，Wang QQ，et al.，In vitro and in vivo haemolytic  studies of tentacle-only extract from jellyfish Cyanea capillata[J]. Toxicol In Vitro.2010，doi：10.1016/j.tiv.2010.02.009)。因此，要深入研 究水母毒素心血管毒性机理，必须去除水母粗毒中高丰度的溶血毒性 组分，以利于心血管毒性蛋白的分离纯化。

研究表明，心血管毒性组分比溶血毒性组分更为耐碱(聂菲，肖 良，张静，等.发形霞水母毒素分离产物溶血活性的比较及其影响因 素分析[J].第二军医大学学报.2008，29(1)：83-86；Xiao L，He Q，Guo  Y，et al.，Cyanea capillata tentacle-only extract as a potential alternative  of nematocyst venom：Its cardiovascular toxicity and tolerance to  isolation and purification procedures[J].Toxicon.2009，53(1)： 146-152)。但至今未见用碱性条件去除水母粗毒中高丰度溶血毒性 组分的相关报道。

发明内容

本发明提供一种水母毒素去溶血毒性的方法，步骤如下：

1.制备水母粗毒提取液

1)采样：将采集到的水母迅速剪下触手，立即将触手干冰冷冻，运 回后置于-70℃超低温冰箱冻存备用；

2)制备水母粗毒提取液：将冻存触手用自配海水于4℃自溶4天， 磁力搅拌器搅拌，收集触手自溶液体，10000g离心15min，上 清液即水母粗毒提取液；

2.制备去溶血毒性的水母毒素溶液

1)用碱性条件破坏溶血毒性蛋白：将上述制备的水母粗毒提取液用 0.1mol/L NaOH调pH至10.5，静置4h，10000g离心15min去 沉淀，取上清；

2)纯化：选用合适的透析袋及透析缓冲液，采用透析方法可将被破 坏的溶血毒性蛋白或其他杂蛋白和杂质去除，而保留水母毒素的 心血管毒性组分。

本发明选用透过分子量为10kDa的透析袋，将上述上清液先 用0.02mol/L、pH6.0醋酸缓冲液透析24h，再将缓冲液更换为 0.02mol/L、pH 9.5Tris-醋酸缓冲液继续透析24h，10000g离 心15min，弃沉淀，上清液即为去溶血毒性的水母毒素溶液。

本发明将水母毒素去溶血毒性前后的蛋白浓度、溶血毒性和 心血管毒性进行了对比实验，结果表明，所制备的去溶血毒性的 水母毒素的蛋白浓度大大低于水母粗毒，溶血毒性基本丧失，而 心血管毒性只略低于水母粗毒，说明本发明方法能有效去除水母 毒素的溶血毒性，并能保存其心血管毒性，有利于深入研究水母 毒素心血管毒性机理。

本发明方法简单，为深入研究水母毒素心血管毒性机理提供 了一种去溶血毒性的简便而有效的方法。

附图说明

图1.水母粗毒与去溶血毒性水母毒素的溶血活性比较图。