[发明专利]一种从基因文库钓取未知基因的方法有效
| 申请号： | 201010137540.6 | 申请日： | 2010-04-01 |
| 公开（公告）号： | CN101792758A | 公开（公告）日： | 2010-08-04 |
| 发明（设计）人： | 辛文;耿亮;张琛;李爱玲 | 申请（专利权）人： | 北京全式金生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100101 北京市朝*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基因 文库 未知 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种从基因文库钓取未知基因的方法，其步骤包括：
(1)模板甲基化：用dam甲基转移酶对文库DNA甲基化，
(2)引物设计：根据未知基因的部分序列设计一对部分重叠的引物，引物长度为25-30个碱基，引物包括5′端重叠部分和3′端非重叠部分，引物长度为25-30个碱基，引物重叠部分碱基为15-18个，非重叠部分碱基至少10个，
(3)PCR扩增：以甲基化文库DNA为模板，加入上述部分重叠引物，进行PCR扩增，
(4)DpnI消化：在步骤(3)获得的扩增产物中，加入DpnI限制性内切酶，消化甲基化模板，
(5)转化DMT细胞：用DpnI消化产物转化DMT细胞，
(6)测序得到包含目的基因的质粒DNA。
2.根据权利要求1所述的从基因文库钓取未知基因的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，加入DpnI限制性内切酶，消化甲基化模板的条件为37℃ ，60min。
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