[发明专利]一种检测人乳中人血清白蛋白含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测人血清白蛋白含量的方法，特别是一种检测人乳中人血清白蛋白含量的方法。

背景技术

人血清白蛋白(HSA)是人血浆中含量最高的蛋白质，它是一个由585个氨基酸组成的单肽链分子，分子量67kDa。整个人血清白蛋白分子富含半胱氨酸(6％)，除了一个半胱氨酸以外，其他的半胱氨酸形成17个二硫键，是构建人血清白蛋白分子二维、三维结构的重要力量。人血清白蛋白有维持血液渗透压、运输和解毒、抗休克作用，能促进肝细胞的修复和再生，对防止和减轻脑组织的水肿亦有显著的疗效。

目前，国内外检测人血清白蛋白主要方法为ELISA法、SDS电泳法。这些方法均有操作复杂、时间较长、准确度低等缺点。鉴于以上方法的缺点，本发明提供了一种利用毛细管电泳技术快速检测人血清白蛋白含量的方法。高压毛细管电泳分析仪是一类包括电泳、色谱及其交叉内容的液相微分离设备。它能快速精确检测出人乳中的微量蛋白。该方法操作简便、准确，检测到出结果时间仅为1h左右。

目前，毛细管电泳技术逐渐应用到蛋白检测领域中，但毛细管电泳技术尚未开发检测人乳中人血清白蛋白含量的方法。本发明成功弥补了乳品领域中的缺点，能准确测定人血清白蛋白的含量，且检出率高，从而有利于人乳的分析检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测人乳中人血清白蛋白含量的方法，该方法所使用的样品缓冲液其刺激性气味小、毒性低，且该方法检出率高、检测结果更加准确。

本发明提供了一种检测人乳中人血清白蛋白含量的方法，该检测方法采用高压毛细管电泳分析仪进行检测，包括如下步骤：

(a)配制不同浓度的人血清白蛋白标准溶液，根据标准溶液，制定人血清白蛋白浓度与高压毛细管电泳分析仪输出的人血清白蛋白的峰面积之间对应关系的标准曲线；

(b)在高压毛细管电泳分析仪中以与标准溶液相同的高压毛细管电泳分析仪的检测参数检测待测人乳；

(c)利用得到的标准曲线和待测人乳的检测结果，确定待测人乳中人血清白蛋白的含量。

在本发明的再一种具体实施方式中，标准溶液的浓度在8mg/ml至0.01mg/ml之间。

在本发明的另一种具体实施方式中，标准溶液的浓度在4mg/ml至0.125mg/ml之间。

在本发明的还一种具体实施方式中，标准溶液的浓度分别为4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml和0.125mg/ml。

上述检测方法的步骤(a)中制定标准曲线时，标准溶液的检测条件为：精确提取标准溶液加入样品管中，超声波清洗1至10min后用高压毛细管电泳分析仪进行测定。

上述检测方法的步骤(b)中待测人乳的检测条件为：装入1.5ml至2ml的离心管中，在2000至5000r/min的离心条件下离心8至12min，离心温度在5至20℃之间，得到检测样品，在检测样品中按1∶1至1∶10的体积比加入样品缓冲液，摇匀之后精确提取10至100μl加入样品管中，超声波清洗1至10min后用高压毛细管电泳分析仪进行测定。

上述样品缓冲液能够使蛋白质分散，它是在1体积份的140至160mmol/L三甲基氨基甲烷缓冲液中加入浓度为40至60mmol/L的乙二胺四乙酸二钠、6至8mol/L的尿素、2至4mg/ml的二硫基苏糖醇、0.02％至0.1％(即2至10mg/ml)的甲基羟乙基纤维素，加入的所述乙二胺四乙酸二钠、尿素、二硫基苏糖醇、甲基羟乙基纤维素的体积份相同，均为1至10体积份，pH值为8.5±0.3。

上述高压毛细管电泳分析仪的检测参数为：检测温度在20至40℃之间，毛细管柱直径在20至75μm之间、长度在200至600mm之间，紫外光检测器或DAD检测器的进样压力在0.1至1psi之间，进样时间在1s至15s之间，分离温度在20至40℃之间，工作电压在10至30kV之间。

上述毛细管柱是涂层或未涂层的。

上述高压毛细管电泳分析仪中电泳缓冲液的pH值在2.0至3.0之间，主要成分为柠檬酸。

上述检测结果的处理方法如下：检测结果为样品分离的图谱，运用高压毛细管电泳分析仪所带的分析软件，积分各峰的面积，计算出试样浓度，再乘稀释倍数，即得实际浓度。