[发明专利]一种检测人乳中人血清白蛋白含量的方法无效
申请号: | 201010134413.0 | 申请日: | 2010-03-29 |
公开(公告)号: | CN101793865A | 公开(公告)日: | 2010-08-04 |
发明(设计)人: | 孙国庆;康小红;刘卫星 | 申请(专利权)人: | 内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司 |
主分类号: | G01N27/447 | 分类号: | G01N27/447 |
代理公司: | 北京汉德知识产权代理事务所(普通合伙) 11328 | 代理人: | 庄一方;李洁 |
地址: | 011517 内*** | 国省代码: | 内蒙古;15 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 检测 乳中 血清 白蛋白 含量 方法 | ||
1.一种检测人乳中人血清白蛋白含量的方法,其特征在于:该检测方法采用高压毛细管电泳分析仪进行检测,且所述的方法包括如下步骤:
(a)配制不同浓度的人血清白蛋白标准溶液,根据所述的标准溶液,制定人血清白蛋白浓度与所述高压毛细管电泳分析仪输出的人血清白蛋白的峰面积之间对应关系的标准曲线;
(b)在所述高压毛细管电泳分析仪中以与所述标准溶液相同的所述高压毛细管电泳分析仪的检测参数检测待测人乳;
(c)利用得到的所述标准曲线和所述待测人乳的检测结果,确定所述待测人乳中人血清白蛋白的含量。
2.根据权利要求1所述的方法,其中,所述标准溶液的浓度在8mg/ml至0.01mg/ml之间。
3.根据权利要求2所述的方法,其中,所述标准溶液的浓度在4mg/ml至0.125mg/ml之间。
4.根据权利要求3所述的方法,其中,所述标准溶液的浓度分别为4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml和0.125mg/ml。
5.根据权利要求1所述的方法,其中所述步骤(a)中制定所述标准曲线时,所述标准溶液的检测条件为:精确提取所述标准溶液加入样品管中,超声波清洗1至10min后用所述高压毛细管电泳分析仪进行测定。
6.根据权利要求1所述的方法,其中所述步骤(b)中所述待测人乳的检测条件为:装入1.5ml至2ml的离心管中,在2000至5000r/min的离心条件下离心8至12min,离心温度在5至20℃之间,得到检测样品,在所述检测样品中按1∶1至1∶10的体积比加入样品缓冲液,摇匀之后精确提取10至100μl加入样品管中,超声波清洗1至10min后用所述高压毛细管电泳分析仪进行测定。
7.根据权利要求6所述的方法,其中所述样品缓冲液能够使蛋白质分散,它是在1体积份的140至160mmol/L三甲基氨基甲烷缓冲液中加入浓度为40至60mmol/L的乙二胺四乙酸二钠、6至8mol/L的尿素、2至4mg/ml的二硫基苏糖醇、0.02%至0.1%的甲基羟乙基纤维素,加入的所述乙二胺四乙酸二钠、尿素、二硫基苏糖醇、甲基羟乙基纤维素的体积份相同,均为1至10体积份,pH值为8.5±0.3。
8.根据权利要求1所述的方法,其中所述高压毛细管电泳分析仪的所述检测参数为:检测温度在20至40℃之间,毛细管柱直径在20至75μm之间、长度在200至600mm之间,紫外光检测器或DAD检测器的进样压力在0.1至1psi之间,进样时间在1s至15s之间,分离温度在20至40℃之间,工作电压在10至30kV之间。
9.根据权利要求8所述的方法,其中所述毛细管柱是涂层或未涂层的。
10.根据权利要求1所述的方法,其中所述高压毛细管电泳分析仪中电泳缓冲液的pH值在2.0至3.0之间,主要成分为柠檬酸。
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