[发明专利]片叶苔素D在制备抗肿瘤药物和抗肿瘤多药耐药逆转药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及片叶苔素D的一种新用途，尤其涉及其在制备抗肿瘤药物和抗肿瘤多药耐药逆转药物中的应用。

背景技术

肿瘤，是目前严重危害人类健康和生活质量的一类疾病，抗肿瘤药物的发现与研制一直是药物研究人员们的工作重点与热点。目前我国患肿瘤人数众多，每年死于肿瘤的人数超过160万。在近二十年来，我国肿瘤死亡率上升了29.42％。在35～59岁的中壮年人群中，肿瘤列居各类死因之首，已成为造成我国最佳劳动力损失的重要原因。因此开发和研制新型抗肿瘤药物是一件具有极其重要意义的工作。

我国现已批准上市的抗肿瘤药物大约有200多种，但随着肿瘤化疗药物的广泛应用，肿瘤的多药耐药性问题越来越突出，已成为肿瘤化疗失败最常见而又最难解决的问题之一，据估计90％以上的肿瘤患者死于不同程度的耐药。肿瘤的多药耐药性(multiple drug resistance，MDR)是指肿瘤细胞接触某种抗肿瘤药物后，不仅对该药物产生耐药性，而且对结构和作用机制不同的多种抗肿瘤药物产生交叉耐药，从而大大降低了抗肿瘤药物的疗效。因此发现和研究新型多药耐药逆转剂同样具有非常重要而又深远的意义。

天然产物一直是抗肿瘤药物的重要来源之一，如紫杉醇，长春新碱等。

片叶苔素D是从干地钱(Marchantia polymorpa L.)中分离得到的环状双联苄类化合物，呈无色块状结晶，分子式为C₂₈H₂₄O₄，分子量为424，熔点为194-196℃，易溶于氯仿、乙酸乙酯等有机溶剂中，结构式如下：

目前，在检索的诸多报道中，未见有片叶苔素D在抗肿瘤和肿瘤多药耐药逆转方面的应用。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了片叶苔素D的一种新用途，即：片叶苔素D在制备抗 肿瘤药物中的应用，和在制备抗肿瘤多药耐药逆转药物中的应用。

以片叶苔素D进行对DNA拓扑异构酶I(TopoI)和拓扑异构酶II(TopoII)活性的测定，片叶苔素D可以选择性地抑制拓扑异构酶II的活性。TOPOII有TopoIIα和TopoIIβ两种亚型，肿瘤组织内TopoIIα高表达，临床上已逐渐以TopoIIα表达水平高低来判断肿瘤的增殖程度。TopoIIβ与肿瘤发生发展的关系目前还不太明确。实验显示片叶苔素D 10μM，20μM，30μM可分别降低TopoIIα基因表达40％，51％，52％。

取慢性粒细胞白血病细胞系K562及其耐药株K562/A02，2×10⁴/孔接种于96孔板中，分别加入不同浓度的阿霉素和较低浓度(2、4和8μg/ml)的片叶苔素D，培养48h。以MTT法测定加入片叶苔素D后，阿霉素对耐药细胞株K562/A02的抑制作用，结果表明8μg/ml片叶苔素D对肿瘤耐药的逆转倍数达8.5。P-糖蛋白泵出实验表明片叶苔素D会对P-糖蛋白活性的产生抑制。

由上述研究结果可知，片叶苔素D能够抑制拓扑异构酶II基因α亚型的表达，并且能够选择性的抑制拓扑异构酶II的活性，具有明显的抗肿瘤作用，同时该化合物还可抑制P-糖蛋白，表现出较好的肿瘤多药耐药逆转活性，是一种非常具有开发前景的化疗药物，可以以其为主成分制备抗肿瘤口服制剂、注射剂，多药耐药逆转口服制剂、注射剂等。

附图说明

图1为琼脂糖凝胶电泳示意图(拓扑异构酶I)；

图2为琼脂糖凝胶电泳示意图(拓扑异构酶II)；

图3为片叶苔素D对拓扑异构酶II基因中α亚型表达的抑制作用示意图；

图4为片叶苔素D对K562/A02细胞的生长抑制作用示意图；

图5为K562/A02细胞中加入不同浓度的片叶苔素D后对罗丹明123荧光强度的影响示意图；

图6为片叶苔素D对K562/A02细胞将罗丹明123泵出效果的影响示意图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明：

实施例1：片叶苔素D对DNA拓扑异构酶I(TopoI)和拓扑异构酶II(TopoII)活性的测定

(1)片叶苔素D的配成：

用分析天平秤取5mg片叶苔素D，加入DMSO(细胞培养级)1179.24μl，得到10mM贮存液，保存于-20℃(临用时用培养基稀释成所需浓度)。

(2)DNA拓扑异构酶的提取：