[发明专利]基于血清蛋白质组学筛选的血吸虫病检测试剂及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于一种疾病的检测试剂，具体涉及用于血吸虫病检测的试剂及制备方法。

背景技术

血吸虫病仍然是世界性分布的主要寄生虫疾病，据估计全球76个国家和地区有2亿 多人感染，7.79亿人受血吸虫感染威胁，每年因血吸虫病死亡的人数超过28万。我国也 是血吸虫病流行区，病原体是日本血吸虫。建国后，由于我国政府的高度控制，血吸虫病 的流行得到了很好的控制，目前现症患者约60余万人，受威胁人群约4000万。然而随着 经济的发展，水利设施的兴建、人口的大量流动，全球气温变暖可能带来的流行区的改变， 以及居民对血吸虫病防范意识的淡漠，我国血吸虫病防治工作任重而道远。

然而血吸虫病的诊断至今没有理想的检测方法，理想诊断技术的缺乏是确定药物化疗 人群(及个体)的一大障碍，因此，开发高度特异敏感的诊断标志物、寻找新的治疗药物 及高效的疫苗候选分子仍是当前血吸虫病研究的重要内容。

目前血吸虫病诊断的方法有病原学、免疫血清学和分子生物学。

1、病原学检测，当前即使在发达国家，病原学检查阳性仍是血吸虫病诊断的金标准， 主要包括粪便虫卵检测和毛蚴孵化法。然而，虫卵检查耗时费力，效率低下，极易漏检， 易污染环境(按照现行国家规定，须在PII生物安全实验室进行操作)，不易自动化操作， 过程不易标准化。

2、分子生物学检测，因其缺乏特异的探针，易出现假阳性，对实验条件要求较高， 成本昂贵，不适宜流行区大规模现场使用，目前仅停留在实验室研究阶段。

3、免疫血清学检测，包括环卵沉淀试验(COPT)，间接血凝试验(IHA)，酶联免疫吸 附试验(ELISA)等。COPT和IHA和病原学检测方法一样，由于敏感性较低、耗时以及难 以标准化，也没有得到广泛的应用和推广。因此，基于ELISA的血清学方法被发展，这种 方法因其具有高度的特异性、敏感性，且稳定可靠，简便快速，无需特殊设备，多年来对 其进行了大量的研究，许多抗原或抗体被测试。首先，血吸虫虫卵可溶性抗原提取物(SEA) 和成虫抗原提取物(AWA)被证实特异性不够理想，因为这些粗提物抗原成分比较复杂。 由于这种原因，使用重组抗原为探针的ELISA得到了广泛的发展。目前测试的重组抗原主 要有日本血吸虫谷胱甘肽转移酶(SjGST)、Sj14-3-3、Sj22.6、Sj32等，其中SjGST和 Sj14-3-3联合检测用于血吸虫病的诊断取得了较为满意的结果。

目前，用于血吸虫病诊断的试剂盒包括“胶体染料免疫渗滤实验(DIGFA)”和“间接 血凝实验(IHA)”。然而上述试剂所用的抗原均为虫源性未知的粗制抗原组分。因此试剂 制备周期长，需要活虫制备抗原，成本较高，同时技术难以标准化，且易出现交叉假阳性 反应。此外，以前的ELISA结果显示，利用cDNA文库筛选的SjGST和Sj14-3-3联合用于急性 和慢性血吸虫病的检测，敏感性分别达到了94.4％(67/71)和80.7％(96/119)，特异性达 到了94.7％。

发明内容

为了提高血吸虫病检测的敏感性和特异性，本发明提供一种用于急、慢性血吸虫病检 测的基于血清蛋白质组学筛选的血吸虫病检测试剂，另一目的是提供一种该试剂的包被制 备方法。

实现上述的目的的技术解决方案如下：

基于血清蛋白质组学筛选的血吸虫病检测试剂由下列重组抗原A和重组抗原B按照1∶ 1混合配伍组成重组抗原混合物；

重组抗原A为重组日本血吸虫亮氨酸氨基肽酶(rSjLAP)            3mg/ml

重组抗原B为重组日本血吸虫果糖二磷酸醛缩酶(rSjFBPA)          3mg/ml；

重组日本血吸虫亮氨酸氨基肽酶(rSjLAP)，分子量：42.8kDa，等电点：6.70，由 398个氨基酸组成：