[发明专利]一株用于生产L-天冬酰胺酶Ⅱ的工程菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.一株用于生产L-天冬酰胺酶II的重组工程菌，其特征在于：该工程菌由重组质粒pET-ASP转化大肠杆菌BL21而得到；其中重组质粒pET-ASP的构建如图1所示。

2.权利要求1所述重组工程菌的构建方法，包括以下步骤：

1)将L-天冬酰胺酶II基因连接在表达质粒pET22b上，得重组质粒pET-ASP；

2)用重组质粒pET-ASP转化大肠杆菌BL21得到重组工程菌。

3.根据权利要求2所述的重组工程菌的构建方法，其特征在于，所说的L-天冬酰胺酶II基因是通过下述步骤获得：从E.coli JM109中分离提取染色体DNA；用PCR方法从上述染色体DNA中钓取L-天冬酰胺酶II基因。

4.一种用权利要求1所述重组工程菌生产L-天冬酰胺酶II的方法，其特征在于，是将重组工程菌进行培养发酵，表达产生L-天冬酰胺酶II。

5.如权利要求4所述的生产L-天冬酰胺酶II的方法，其特征在于：用于重组工程菌培养的培养基为：

种子培养基配方为：牛肉膏含量5g/L～25g/L，蛋白胨含量5g/L～20g/L，NaCl含量8g/L～15g/L，氨苄青霉素含量为0.02g/L～1.85g/L，pH值为6.5～7.8；

摇瓶培养基配方为：酵母浸出膏含量15g/L～40g/L，蛋白胨含量8g/L～30g/L，甘油含量2g/L～10g/L，pH值为6.5～7.8；

发酵培养基配方：玉米浆含量50g/L～150g/L，甘油含量为5g/L～30g/L，pH为6.5～7.5。

6.如权利要求5所述的生产L-天冬酰胺酶II的方法，其特征在于：所述种子培养配方为：牛肉膏含量5g/L～10g/L，蛋白胨含量9g/L～15g/L，NaCl含量9g/L～13g/L，氨苄青霉素含量为0.08g/L～1.25g/L，pH值为6.9～7.3；

所述的摇瓶培养基配方为：酵母浸出膏含量20g/L～25g/L，蛋白胨含量11g/L～15g/L，甘油含量3g/L～6g/L，pH值为6.9～7.3；

所述的发酵培养基配方为：玉米浆含量为70g/L～100g/L，甘油含量为9g/L～14g/L，pH为6.9～7.3。

7.如权利要求4所述的生产L-天冬酰胺酶II的方法，其特征在于：培养条件如下：

摇瓶培养条件：接种量0.5％～5％，温度30℃～40℃，振荡转速180rpm～300rpm，装液量8％～25％，培养0h～10h后加入诱导剂IPTG，终浓度为1g/L～10g/L，诱导8h～24h。优选的摇瓶培养条件为：接种量1％～2％，温度35℃～38℃，振荡转速200rpm～230rpm，装液量10％～15％，培养1h～4h后加入诱导剂IPTG，终浓度为2g/L～4g/L，诱导1h～4h；

发酵培养条件：接种量1％～10％，发酵温度30℃～40℃，搅拌速度160rpm～280rpm，罐压0.02MPa～0.10MPa，装液量40％～75％，通风量1∶0.4VVM～1∶2.0VVM，培养2h～14h后加入诱导剂乳糖，终浓度为1g/L～3g/L，诱导8h～24h。优选的发酵培养条件为：接种量1％～5％，发酵温度35℃～38℃，搅拌转速190rpm～230rpm，罐压0.04MPa～0.08MPa，装液量55％～70％，通风量1∶0.7VVM～1∶1.0VVM，培养8h～11h后加入诱导剂乳糖，终浓度为3g/L～6g/L，诱导10h～14h。