[发明专利]LTBP-2在制备检测心力衰竭试剂盒中的应用及含有该蛋白的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种辅助性转化生长因子结合蛋白2(LTBP-2)的新用途，具体地说是一种利用辅助性转化生长因子结合蛋白2在制备检测心力衰竭试剂盒中的应用。

背景技术

TGF-β最初由鼠类肉瘤中分离出来，可以增强表皮生长因子(EGF)对非肿瘤成纤维细胞的转化和增殖活性。人体几乎每种细胞都可以产生TGF-β，生理情况下TGF-β可以调节细胞的增殖、分化、参与胚胎发育、免疫调节等过程，在许多疾病状态下，TGF-β产生增多，如肿瘤、纤维化疾病及遗传性出血性毛细血管扩张。研究表明肿瘤细胞及其基质细胞产生大量TGF-β，增加新生血管形成，抑制免疫，促进肿瘤转移侵犯其他器官。TGF-β与心血管疾病也有密切联系。

成熟的TGF-β是由两个结构相同或相近的、分子量12.5kDa的亚单位通过二硫键形成的二聚体，但从细胞中分泌出来时，是以无活性的复合体L-TGF-β形式存在的。这种无活性的复合体又有两种形式：由成熟TGF-β通过其N-末端与LAP非共价结合，LAP又与辅助性转化生长因子结合蛋白(LTBPs)共价结合，形成LTBPs-LAP-TGF-β复合物，称为LL-TGF-β；另一种形式仅由成熟TGF-β通过其N-末端与LAP非共价结合形成，称为SL-TGF-β。

L-TGF-β复合体通过LTBP结合到细胞外基质(ECM)中，以无活性的形式贮存下来。而L-TGF-β的激活是蛋白酶依赖性的，血小板反应蛋白1和纤溶酶可以切断LAP与成熟TGF-β间的非共价结合，使成熟TGF-β从L-TGF-β复合体中释放出来，与其受体结合，发挥生物学作用。

辅助性转化生长因子结合蛋白(LTBPs)是一类细胞外基质糖蛋白，主要包括4个亚型LTBP-1、LTBP-2、LTBP-3、LTBP-4，属于LTBPs/fibrillins超家族，蛋白质结构中含有2种不同的富含半胱氨酸的重复序列，EGF样6-半胱氨酸重复序列和8-半胱氨酸重复序列，大部分LTBP可与SL-TGF-β结合，辅助L-TGF-β的分泌和在ECM中贮存。EGF样序列介导了多种非共价结合作用，而8-半胱氨酸重复序列介导了蛋白与蛋白间的共价结合作用。

LTBP-2基因定位于14q24，分子量240KDa。肺部是LTBP-2表达最多的部位，其他如肝、脾、骨骼肌、胚胎和心脏中也有少量表达。LTBP-2含有20个EGF样序列(其中16个可与Ca2+结合)和4个8-半胱氨酸重复序列(N-端第1个为杂交序列)。LTBP-2氨基末端的2个EGF样序列与其他EGF样序列不同，氨基末端的第1个8-半胱氨酸重复序列缺少1个半胱氨酸残基，与另外3个8-半胱氨酸重复序列有差别。与其他LTBPs不同，LTBP-2的第3个8-半胱氨酸重复序列中缺少能与LAP结合所必需的共同序列，以致不能与L-TGF-β共价结合。与TGF-β结合的8-半胱氨酸重复序列内有特殊的基序，LTBP-2和fibrillins与其无结合能力，但将此特殊基序插入LTBP-2的第3个8-半胱氨酸序列中，将使LTBP-2获得与SL-TGF-β的结合能力。LTBP2可与LTBP1竞争与fibrillins的结合从而负性调节LTBP1与微纤维的结合。另外，在LTBP2的N末端有整联蛋白识别的序列RGD，证实它参与了细胞粘附作用。

LTBP-2的功能包括参与TGF-β的组装、分泌和活化；促进TGF-β在ECM中贮存；参与细胞粘附作用等。

心力衰竭是由于初始的心肌损害和应力作用：包括收缩期或舒张期心室负荷过重和(或)心肌细胞数量和质量的变化，引起心室和(或)心房肥大和扩大继以心室舒缩功能低下，逐渐发展而成。是一种世界范围内的严重疾病，它不是一个独立的疾病，是由多种因素导致，其分子机制并不清楚，可能与相关的基因和蛋白质等表达异常有关。基因是决定心血管疾病表型的重要物质，基因芯片技术普遍用于检测心衰中基因表达的改变，为研究心衰内在的分子机制提供了一个很好的技术平台。(Global gene expression in the failingmyocardium.Circulation，2009，73(9)：1568-76.)