[发明专利]有效跳跃人杜兴肌营养不良前mRNA外显子45的方法和手段

说明书

发明领域

本发明涉及遗传学领域，更具体而言涉及人类遗传学领域。本发明尤其涉及人杜兴肌营养不良前mRNA剪接的调节。

发明背景

肌病是导致肌肉功能性损伤的病症。肌营养不良(MD)是指特征为骨骼肌的逐渐衰弱和退化的遗传学疾病。杜兴肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy，DMD)和贝克肌营养不良(Becker muscular dystrophy，BMD)是最常见的儿童形式的肌营养不良。它们是隐性遗传疾病，因为负责DMD和BMD的基因位于X染色体上，突变主要影响男性，发病率约为每3500名男孩中一例。

DMD和BMD是由编码抗肌萎缩蛋白的DMD基因的遗传学缺陷导致，所述抗肌萎缩蛋白是细胞骨架和细胞外基质之间相互作用所必需的肌肉蛋白，用于在收缩期间维持肌纤维的稳定性。DMD是严重且致死的神经肌肉病症，导致在12岁之前依靠轮椅维持，并且由于呼吸或心脏衰竭，DMD患者通常在30岁之前死去。相比之下，BMD患者通常直至晚年仍能走动，并具有近乎正常的预期寿命。DMD基因中的DMD突变主要特征为移码插入或缺失或无义点突变，导致功能性抗肌萎缩蛋白的缺乏。通常，BMD突变保持阅读框完整，允许合成具有部分功能性抗肌萎缩蛋白。

最近十年，已经出现为了恢复DMD转录本的破坏的阅读框而进行的剪接的特定修饰，作为杜兴肌营养不良(DMD)的有希望的疗法(van Ommen，van Deutekom，Aartsma-Rus，Curr Opin MolTher.2008；10(2)：140-9，Yokota，Duddy，Partidge，Acta Myol.2007；26(3)：179-84，van Deutekom et al.，N Engl J Med.2007；357(26)：2677-86)。

使用干扰剪接信号的反义寡核苷酸(AON)，可以在DMD前mRNA中诱导特定的外显子跳跃，从而恢复开放阅读框并将严重的DMD转变成较轻微的BMD表型(van Deutekom et al.Hum Mol Genet.2001；10：1547-54；Aartsma-Rus et al.，Hum Mol Genet 2003；12(8)：907-14.)。在由于外显子23中无义突变导致抗肌萎缩蛋白缺乏的mdx小鼠模型中首次获得体内概念验证(proof-of-concept)。肌内注射和静脉内注射靶向突变的外显子23的AON恢复抗肌萎缩蛋白的表达持续至少三个月(Lu et al.Nat Med.2003；8：1009-14；Lu et al.，Proc Natl Acad Sci U S A.2005；102(1)：198-203)。这是通过纤维膜处抗肌萎缩蛋白关联蛋白的恢复以及处理的肌肉的功能性改善来实现的。还在hDMD小鼠模型中实现人外显子的体内跳跃，所述hDMD小鼠模型包含整合在小鼠染色体5中的人DMD基因的完整拷贝(Bremmer-Bout et al.Molecular Therapy.2004；10：232-40；′t Hoen et al.J Biol Chem.2008；283：5899-907)。