[发明专利]产生L-氨基酸的方法

权利要求书

1.一种产生L-氨基酸的方法，包括在培养基中培养属于肠杆菌科(Enterobacteriaceae)并具有L-氨基酸产生能力的细菌以在培养基中产生和累积所述L-氨基酸，并从培养基收集所述L-氨基酸，其中：

所述细菌已经过修饰从而增加了gltP基因和/或gltS基因的表达，且所述L-氨基酸选自L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-甲硫氨酸、L-丙氨酸、L-异亮氨酸和L-高丝氨酸。

2.根据权利要求1的方法，其中所述gltP基因编码下述(A)或(B)所示的蛋白质：

(A)具有SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列并具有L-谷氨酸转运蛋白活性的蛋白质，

(B)具有在SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列中包含一个或几个氨基酸残基的取代、缺失、插入、添加或倒位而得到的氨基酸序列，并具有L-谷氨酸转运蛋白活性的蛋白质。

3.根据权利要求2的方法，其中所述gltP基因编码下述(A1)或(B1)所示的蛋白质：

(A1)具有SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的蛋白质，

(B1)具有在SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列中包含一个或几个氨基酸残基的取代、缺失、插入、添加或倒位而得到的氨基酸序列，并具有L-谷氨酸转运蛋白活性的蛋白质。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述gltP基因是下述(a)或(b)所示的DNA：

(a)具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列的DNA，

(b)能够与同SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列互补的序列或者与可从该核苷酸序列制备的探针在严格条件下杂交，且编码具有L-谷氨酸转运蛋白活性的蛋白质的DNA。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述gltS基因编码下述(C)或(D)所示的蛋白质：

(C)具有SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列并具有L-谷氨酸转运蛋白活性的蛋白质，

(D)具有在SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列中包含一个或几个氨基酸残基的取代、缺失、插入、添加或倒位而得到的氨基酸序列，并具有L-谷氨酸转运蛋白活性的蛋白质。

6.根据权利要求5的方法，其中所述gltS基因编码下述(C1)或(D1)所示的蛋白质：

(C1)具有SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的蛋白质，

(D1)具有在SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列中包含一个或几个氨基酸残基的取代、缺失、插入、添加或倒位而得到的氨基酸序列，并具有L-谷氨酸转运蛋白活性的蛋白质。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述gltS基因是下述(c)或(d)所示的DNA：

(c)具有SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列的DNA，

(d)能够与同SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列互补的序列或者与可从该核苷酸序列制备的探针在严格条件下杂交，且编码具有L-谷氨酸转运蛋白活性的蛋白质的DNA。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述基因的表达是通过增加该基因的拷贝数或通过修饰该基因的表达调控序列而得到增强的。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述L-氨基酸是L-赖氨酸，且在该细菌中ybjE基因的表达得到增加。

10.根据权利要求9的方法，其中所述ybjE基因编码下述(E)或(F)所示的蛋白质：

(E)具有SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列或SEQ ID NO：6中第17至315号氨基酸的氨基酸序列的蛋白质，

(F)具有在SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列或SEQ ID NO：6中第17至315号氨基酸的氨基酸序列中包含一个或几个氨基酸残基的取代、缺失、插入、添加或倒位而得到的氨基酸序列，并具有L-赖氨酸分泌活性的蛋白质。