[发明专利]血管发生抑制

说明书

技术领域

本发明涉及用于抑制血管发生或治疗病理性新血管形成如哮喘、关节炎、癌症和黄斑变性的组合物和方法。

背景技术

病理性新血管形成是如湿性年龄相关性黄斑变性(AMD)、糖尿病增殖性视网膜病变、类风湿性关节炎、骨关节炎和哮喘的疾病的关键成分。其还在肿瘤的生长和扩散中起重要作用。新血管形成由促血管发生因子和抗血管发生因子的精巧平衡调节。

已知血管内皮生长因子(VEGF)是新血管形成必需的。已显示通过VEGF拮抗剂抑制或降低VEGF活性在AMD，关节炎动物模型和多种肿瘤模型中抑制新血管形成。抑制或降低VEGF活性的VEGF拮抗剂包含但不限于VEGF抗体、可溶性受体、受体融合蛋白质、肽和小分子。

已显示VEGF-R1(Flt-1)和VEGF-R2(KDR)蛋白质以高亲和力结合VEGF。Flt-1和KDR在其胞外区都具有7个Ig-样结构域。已显示结构域2是VEGF结合必需的。全长、可溶性受体(结构域1-7)和结构域1-3各自与IgG Fc的融合蛋白可有效地结合VEGF。然而，Fc与Ig-样结构域2单独融合不能结合VEGF，Ig-样结构域1和2也如此。Davis-Smyth，1996。因此，Ig-样结构域1和3似乎需要与结构域2一起进行有效的VEGF结合。

发明概述

本发明的一个实施方案提供融合蛋白质。该融合蛋白质具有式X-Y-Z。X包含选自胞外受体、抗体可变区、细胞因子、趋化因子和生长因子的多肽。Y基本上由5-25个氨基酸残基的多肽组成。Z是IgG重链分子的CH3区。

本发明的另一个实施方案是式X-Y-Z的多肽。X包含选自胞外受体、抗体可变区、细胞因子、趋化因子和生长因子的多肽。Y基本上由提供5-25个氨基酸残基的空间间隔(seperation)的接头部分组成。Z是IgG重链分子的CH3区。

本发明的另一个方面是式X-Y-Z的融合蛋白质。X包含选自胞外受体、抗体可变区、细胞因子、趋化因子和生长因子的多肽。Y基本上由5-25个氨基酸残基的多肽组成。Z是抗体分子的Fc部分。

还提供式X-Y-Z的融合蛋白质。X包含选自胞外受体、抗体可变区、细胞因子、趋化因子和生长因子的多肽。Y基本上由提供5-25个氨基酸残基的空间间隔的接头部分组成。Z是抗体分子的Fc部分。

本发明的另一个方面是多聚化多肽X的方法。通过多肽Y将多肽X连接至多肽Z形成多肽XYZ。X包含选自胞外受体、抗体可变区、细胞因子、趋化因子和生长因子的多肽。Y基本上由5-25个氨基酸残基的多肽组成。Z是IgG重链分子的CH3区。形成的多肽XYZ多聚化。

本发明的另一个实施方案提供多聚化多肽X的方法。通过Y部分将多肽X连接至多肽Z形成聚合物XYZ。X包含选自胞外受体、抗体可变区、细胞因子、趋化因子和生长因子的多肽。Y基本上由提供5-25个氨基酸残基的空间间隔的接头部分组成。Z是IgG重链分子的CH3区。这样形成的多肽XYZ多聚化。

在本发明的一个实施方案中提供核酸分子。该核酸分子编码包含VEGF-R1(Flt-1)的Ig-样结构域2、接头和多聚化结构域的融合蛋白质。该融合蛋白质包含选自SEQ ID NO：2、8、21、23和25的序列。

在本发明的另一个实施方案中提供融合蛋白质。该融合蛋白质包含VEGF-R1(Flt-1)的Ig-样结构域2、接头和多聚化结构域。该融合蛋白质包含选自SEQ ID NO：2、8、21、23和25的序列。

在本发明的另一个实施方案中提供体外方法。将核酸分子递送至分离的哺乳动物细胞。该核酸分子编码包含VEGF-R1(Flt-1)的Ig-样结构域2、接头和多聚化结构域的融合蛋白质。该融合蛋白质包含选自SEQ IDNO：2、8、21、23和25的序列。该融合蛋白质的表达由启动子控制。形成表达融合蛋白质的细胞。

本发明的另一个实施方案是递送融合蛋白质至哺乳动物的方法。将表达该融合蛋白质的哺乳动物细胞递送至哺乳动物。细胞表达和分泌该融合蛋白质，从而向哺乳动物供给该融合蛋白质。该融合蛋白质包含VEGF-R1(Flt-1)的Ig-样结构域2、接头和多聚化结构域。该融合蛋白质包含选自SEQ ID NO：2、8、21、23和25的序列。