[发明专利]用胶体金免疫层析试验检测伏马毒素的方法

权利要求书

1、一种用胶体金免疫层析试验快速检测伏马毒素的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，将伏马毒素半抗原通过戊二醛法分别与KLH和OVA偶联；

步骤二，利用步骤一所得伏马毒素KLH偶联物，采用常规方法制备抗伏马毒素的单克隆抗体；

步骤三，用柠檬酸三钠还原法制备40nm的胶体金，用该胶体金标记经过透析除盐处理的抗伏马毒素的单克隆抗体；

步骤四，将步骤三得到的单克隆抗体蛋白喷涂到金标垫上，将伏马毒素-OVA偶联物喷涂到T线，兔抗鼠的单克隆抗体喷涂到C线，组装成试纸条，干燥；

步骤五，将待测样品用甲醇提取，离心，取上清，将上清滴入试纸条的样本槽中，获取T线和C线的显色，鉴定，得到结果。

2、根据权利要求1所述的用胶体金免疫层析试验快速检测伏马毒素的方法，其特征是，步骤三中，所述胶体金的制备方法具体为：将100ml的0.005％HAuCl4溶液加热至沸腾，之后加入0.5～1ml的1％柠檬酸三钠水溶液，煮沸7～10min，最后加三蒸水至100ml，制备得到40nm的胶体金溶液；其中，百分数为重量体积百分数。

3、根据权利要求1所述的用胶体金免疫层析试验快速检测伏马毒素的方法，其特征是，步骤三中，所述标记具体为：在搅拌的条件下，向胶体金溶液中加入单克隆抗体，使其终浓度达到40ug/mL，25℃下孵育5min，用0.1mol/L K2CO3调节胶体金溶液的pH为9.0，然后加入10％BSA至BSA的终浓度为0.1％，10000rpm离心20min，弃上清，再用0.01mM pH为9.0的Tris缓冲液恢复，重复1次，之后将沉淀重悬于原体积的1/10的0.01mM pH为9.0的Tris缓冲液中，最后加入10％BSA至BSA的终浓度为0.1％，4℃储存备用；其中，百分数为重量体积百分数。

4、根据权利要求1所述的用胶体金免疫层析试验快速检测伏马毒素的方法，其特征是，步骤四中，所述干燥为37℃烘箱干燥。

5、根据权利要求1所述的用胶体金免疫层析试验快速检测伏马毒素的方法，其特征是，步骤五中，所述甲醇为体积分数为80％的甲醇。

6、根据权利要求1所述的用胶体金免疫层析试验快速检测伏马毒素的方法，其特征是，步骤五中，所述离心为2500g离心15分钟。

7、根据权利要求1所述的用胶体金免疫层析试验快速检测伏马毒素的方法，其特征是，步骤五中，所述鉴定具体为：在C线上出现棕红色条带，说明待测样品中含伏马毒素；在T线和C线上均出现棕红色条带，说明待测样品中不含伏马毒素。