[发明专利]一种利用表面等离子谐振技术检测特定糖链蛋白、抗体或抗原的生物芯片

权利要求书

1.一种利用表面等离子谐振技术检测特定糖链蛋白、抗体或抗原的生物芯片，其特征在于，所述的特定糖链蛋白包括糖链异常蛋白，所述的生物芯片在基底上有金属膜，在金属表面上固定有连接层，在连接层上固定有凝集素、抗原或抗体。

2.如权利要求1所述的利用表面等离子谐振技术检测特定糖链蛋白、抗体或抗原的生物芯片，其特征在于，所述金属膜的厚度为55～100nm。

3.如权利要求1所述的利用表面等离子谐振技术检测特定糖链蛋白、抗体或抗原的生物芯片，其特征在于，所述的金属膜选自金膜、银膜或铂膜。

4.如权利要求1所述的利用表面等离子谐振技术检测特定糖链蛋白、抗体或抗原的生物芯片，其特征在于，所述的连接层是由一端具有活性基团、另一端通过巯基与金属膜反应的长链巯基乙醇构成的混合自组装单分子层，再经激活制备而成。

5.如权利要求4所述的利用表面等离子谐振技术检测特定糖链蛋白、抗体或抗原的生物芯片，其特征在于，所述的激活的过程包括以下步骤：

(1)将固定有混合自组装单分子层表面的芯片用交联剂1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺活化，再与2-(2-氨基乙氧基)乙醇反应；

(2)将步骤(1)得到的芯片与表氯醇反应生成环氧功能化的表面，然后与多聚糖或可膨胀的有机聚合体结合；

(3)用溴乙酸处理2～5次使多聚糖或可膨胀的有机聚合体的多糖链羧基化。

6.如权利要求5所述的利用表面等离子谐振技术检测特定糖链蛋白、抗体或抗原的生物芯片，其特征在于，所述的多聚糖选自葡聚糖、甘露聚糖、半乳甘露聚、果胶半乳糖或琼脂糖。

7.如权利要求4所述的利用表面等离子谐振技术检测特定糖链蛋白、抗体或抗原的生物芯片，其特征在于，所述的长链巯基乙醇的为：

(1)HS-(CH2)n-R和HS-(CH2)n-R’的混合物，

(2)不对称的二烷基二硫化物R-(CH2)mS-S(CH2)n-R’，和

(3)不对称的二烷基硫化物R-(CH2)m-S-(CH2)n-R’；

其中，m和n分别选自5到20的正整数，R和R’分别表示烷基的末端基团，选自甲基、羟基、羧基或氨基。

8.一种特定糖链蛋白、抗体或抗原的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)建立标准品的表面等离子谐振技术的标准曲线；

a)取权利要求1～7所述的检验特定糖链、抗体或抗原的生物芯片，用SPR分析仪或分光光度计测量得到第一组数据；

b)在所述的生物芯片上加入标准品，待凝集素、抗原或抗体与特定糖链蛋白、抗体或抗原结合后，用SPR分析仪或分光光度计测量得到第二组数据；

c)分析比较所述的第一组数据和所述的第二组数据，得到标准曲线；

(2)按照同步骤(1)相同的方法建立待测样品的曲线；

(3)将标准品的曲线与待测样品的曲线比较，从而确定待测样品中特定糖链蛋白、抗体或抗原是否存在以及存在的数量。

9.权利要求8所述的特定糖链蛋白、抗体或抗原的检验方法在检测肿瘤、代谢性疾病或免疫性疾病的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤、代谢性疾病或免疫性疾病选自肝癌、胃癌、肺癌、肠癌、肝癌、前列腺癌、食管癌、鼻咽癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、糖链异常IgA肾病或糖尿病。