[发明专利]亨利兜兰种子试管苗的培育方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培育技术领域，特别是涉及亨利兜兰种子试管苗的一种无菌培育方 法。

背景技术

亨利兜兰(Paphiopedilum henryanum Braem)是兰科(Orchidaceae)兜兰属( Paphiopedium)植物，是国家一级重点保护濒危物种。《华盛顿公约》(即《濒危野生动植 物种国际贸易公约》，Convention on International Trade in Endangered Species of Wild Fauna and Flora，CITES)把所有兜兰属植物列入其附录一名录，受到国际社会的严格 保护。兜兰是兰科植物中最具特色的一个类群，也是最奇特的观赏兰花。花形奇特，唇瓣呈 兜状，酷似旧时欧洲淑女的拖鞋，故又称拖鞋兰。背萼特别发达，具有艳丽的花纹。兜兰与 其他兰花明显不同的地方是：2枚能育雄蕊着生在蕊柱的两侧；发达的背萼呈扁圆形或倒心 形，在各瓣中最显著。因此，兜兰以其独特魅力和许多优异特性而备受世界花卉爱好者的钟 爱。

亨利兜兰分布于中国云南、广西、贵州，越南、缅甸也有分布。花色粉红，上萼片具斑 点。花期为夏秋季。亨利兜兰同大多数兰花一样，种子没有胚乳，在自然环境中需与真菌共 生才能萌发，且萌发率极低。兰花的传统繁殖方式为分株繁殖，繁殖系数低、速度慢，难以 满足保护和开发的要求。兰花的组织培养始于20世纪60年代，之后组培在其它许多兰花上获 得了成功。但兜兰人工授粉结实率低，其无菌播种和组织培养难度大，是兰科植物中种子试 管培养最困难的属之一。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供亨利兜兰种子试管苗的一种无菌培育方法，该方法经 过对培养基的筛选，优选出适合亨利兜兰种子试管苗培育的培养基，种子萌发率能达到45％ 以上，成苗率、移栽成活率均在90％以上。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：

本发明亨利兜兰种子试管苗的培育方法：

(1)种子萌发：将亨利兜兰果实灭菌后取出种子，接种于种子萌发培养基上，暗培养3 周后转入弱光培养，至种子发育成原球茎，种子萌发培养基为：1/4MS+15％(体积)椰乳 +20g/L蔗糖+1g/L活性炭+0.6％琼脂，PH 5.2～5.4；

(2)增殖分化：将原球茎转接到增殖分化培养基上，弱光培养至原球茎分化出芽，增 殖分化培养基为：1/2MS+0.5～2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+2g/L胰蛋白胨+15％( V/V)椰乳+20g/L蔗糖+1g/L活性炭+0.6％琼脂，PH 5.2～5.4；

(3)壮苗生根：然后将芽转接到壮苗生根培养基上进行生根培养后即可炼苗移栽，壮 苗生根培养基为：1/2MS+1.0mg/L NAA+15％(体积)椰乳+20g/L蔗糖+1g/L活性炭+ 0.6％琼脂，PH 5.2～5.4。

上述增殖分化培养基为：1/2MS+2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+2g/L胰蛋白胨+ 15％(体积)椰乳+20g/L蔗糖+1g/L活性炭+0.6％琼脂，PH 5.2～5.4

前述亨利兜兰种子试管苗的培育方法中，所述弱光培养的光照强度为500～1000Lx，培 养温度为23～27℃。

进一步的，前述亨利兜兰种子试管苗的培育方法：

(1)种子萌发：首先将授粉150天的亨利兜兰果实经表面消毒处理后，在超净工作台上 剖开果实，取出种子后接种于种子萌发培养基上，暗培养3周后转入弱光培养，至种子发育 成原球茎；

(2)增殖分化：将原球茎转接到增殖分化培养基上，弱光培养至原球茎分化出芽，出 芽后10周再继代增殖培养一次；

(3)壮苗生根：然后将芽转接到壮苗生根培养基上进行生根培养，光照强度增加至 2000～3000Lx，当苗长至4～5厘米高、根长1.5～2厘米时即可炼苗移栽。

上述技术方案是通过实验筛选出来的，具体如下：

1、实验培养基

种子萌发培养基：

(1)MS+15％(V/V)椰乳+20g/L蔗糖+1g/L活性炭+0.6％琼脂，PH 5.2～5.4；

(2)1/2MS+15％(V/V)椰乳+20g/L蔗糖+1g/L活性炭+0.6％琼脂，PH 5.2～5.4；