[发明专利]一种载有基因的磷酸钙复合纳米粒及其制法与用途

权利要求书

1.一种载有基因的磷酸钙复合纳米粒，其特征是：它是载有治疗基因的磷酸钙纳米粒，该复合纳米粒为球形，粒径小于50nm。

2.根据权利要求1所述的载有基因的磷酸钙复合纳米粒，其特征是：所述的基因质粒是TGF-β1。

3.一种权利要求1所述的载有基因的磷酸钙复合纳米粒的制备方法，其特征是：它是将0.1M Igepal CO-520溶于25ml环己烷，加入1.36M氯化钙，搅拌混匀形成微乳1；将0.1M Igepal CO-520，50μlTis-HCL(pH 7.4)溶于25ml环己烷，加入磷酸氢二钠和基因质粒，加入磷酸氢二钠的质量0.35M，磷酸氢二钠与质粒的质量比为0.1∶1～10∶1，搅拌形成微乳2，将微乳2缓慢滴加到微乳1中，搅拌10min，形成载有基因的磷酸钙复合纳米粒的乳液。

4.一种权利要求1所述的载有基因的磷酸钙复合纳米粒的分离方法，它由如下步骤组成：

(1)层析柱的预处理：

取90g硅球加入含有0.336mL氨基丙基三乙氧基硅烷(aminopropyltriethoxysilane，APS)，1.5mL冰乙酸，7.5μL双蒸水的150mL乙醇溶液中，搅拌过夜，70℃烘干备用；

(2)载有基因的磷酸钙复合纳米粒的分离：

将权利要求2制得的载有基因的磷酸钙复合纳米粒乳液过步骤(1)预处理的硅胶层析柱，先用无水乙醇洗脱环己烷及游离的质粒和盐，然后用含有5×10^-4mol/LNaCl的70％乙醇溶液洗脱载基因的磷酸钙复合纳米粒；

(3)载基因的磷酸钙复合纳米粒乙醇液的浓缩：

将步骤(2)所得的含有载基因的磷酸钙复合纳米粒的乙醇液在37℃旋转减压蒸发6h除去乙醇，浓缩液置于12KD的透析袋中，置于磷酸盐缓冲液中，4℃透析过夜，即得到载基因的磷酸钙复合纳米粒。

5.根据权利要求1所述的载基因的磷酸钙复合纳米粒在干细胞传递中应用。