[发明专利]仔猪副伤寒活疫苗的制备方法及其产品

说明书

技术领域

本发明涉及一种动物活疫苗的制备方法，尤其涉及一种仔猪副 伤寒活疫苗的制备方法以及由该方法制备得到的产品，属于副伤寒 活疫苗领域。

背景技术

仔猪副伤寒是由猪霍乱沙门氏菌引起的急性、亚急性或慢性传 染病。主要发生于2-4月龄仔猪，危害性极大，急性病例主要表现 为败血症，症状为体温突然升高、精神不振、不食，后期间有下 痢、呼吸困难、耳根、胸前和腹下皮肤有紫红色斑点，有时出现症 状后24h内死亡，病死率很高。亚急性和慢性症状表现为消瘦、下 痢和肠炎，病情往往拖后2-3周或更长，最后极度消瘦，衰竭而 死。1948年苏联人伊瓦诺夫因成功研制出仔猪副伤寒灭活菌苗，获 得了斯大林勋章。

国外很早就使用灭活菌苗，我国在五六十年代也开始使用灭活 菌苗，但灭活菌苗的使用效果很不理想，1960年我国曾制造了含各 种不同佐剂的灭活菌苗共52批对235头仔猪进行免疫试验，均免疫 两次，攻毒后保护率仅为29.9％。1961年我国开始弱毒菌株培育及 弱毒菌苗的研制，于1964年选出一株毒力弱而又稳定、免疫原性良 好的菌种，编号为C500。

在生产C500弱毒菌苗过程中，因采用大扁瓶琼脂培养生产菌 苗，存在劳动强度大和产量低的缺点，从七十年代初开始各生物制 品厂陆续改用液体通气培养法生产。但由于通气培养有部分菌体生 命较为脆弱，容易出现菌苗冻干后活菌率较低，而引起仔猪反应较 大，并偶尔有出现不安全的情况。后经各厂家改善培养和冻干技术 以及进行菌苗口服试验，口服试验证明口服免疫的效果与注射的效 果同样良好，而且口服活菌率低至37％的菌苗也很安全，据此结果 规定了冻干活菌率不低于50％的用于注射或口服；冻干活菌率低于 50％的菌苗不能注射但可用于口服。此规定可保证更多的菌苗出厂使 用。我国于1976年将液体通气培养法批准列入《兽用生物制品规 程》，在全国许多生物制品生产厂家投入生产，推广应用。此方法一 直延用至今，此培养方法一直存在着菌数低、冻干死亡率高的问 题，生产难度大，产量低、成本高。因市场需求量大，各生产厂家 时常都有出现断货的现象发生，多年来一直困扰着各生产厂家。

《兽用生物制品规程》对仔猪副伤寒活疫苗的生产方法进行了 具体的规范，按《规程》生产方法如下：

1、一级菌种的制备：

菌种用普通肉汤稀释或经普通肉汤培养繁殖后，接种普通琼脂 平板，37℃培养18-20h，选取菌落为圆形、边缘整齐、突起、半透 明、略湿润的光滑型中等大小菌落5-10个，混合接种于普通琼脂斜 面若干支，37℃培养24h经纯粹检验，并用1/500吖啶黄溶液做玻 片凝集试验检查合格，作为一级菌种，在2-8℃保存，应不超过2 个月此间可移植1-2次，在培养基上继代，不超过5代。

2、二级菌种的制备：

取一级菌种接种普通肉汤琼脂扁瓶，37℃培养24h(普通琼脂 培养物用普通肉汤洗下制成浓度适宜的菌液)，纯粹检查合格后，即 可作为种子。在2-8℃保存，应不超过2日。

3、菌液培养： 将二级菌种按培养基总量的1％-2％接种于含1％-1.5％蛋白胨的普通肉 汤中，在37℃通气培养18-21h，培养过程中根据需要加入适量的消 泡剂，并根据PH升高情况加入适量灭菌40％葡萄糖液以控制PH。培 养结束后立即加入经过灭菌及预热至37℃的稳定剂，使疫苗含1.5％ 明胶及5％蔗糖，充分混匀后按规定头份定量分装。每头份活菌不少 于30亿个。

按照上述方法生产，培养菌数一般在180-260亿/ml，按每头份 活菌30亿个计算配苗，最大分装量为3.8ml/瓶，规程规定最低为 20头份/瓶，此菌冻干死亡率在40％-60％，按最高培养菌数260亿和 60％死亡率计算接近《规程》规定的最低头份标准，此培养方法一直 存在着菌数低、冻干死亡率高的问题，生产难度大，产量低、成本 高，有待改进。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有的仔猪副伤寒活疫苗的 生产方法所存在的菌数低、冻干死亡率高，生产难度大，产量低， 成本高等问题，提供一种新的仔猪副伤寒活疫苗的生产方法，该生 产方法可使细菌培养时间缩短，培养菌数明显提高，冻干死亡率大 幅度下降。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：