[发明专利]大蒜样品中农药多残留测定的前处理方法

说明书

技术领域：

本发明属于农药残留测定技术领域，涉及大蒜中农药残留快速检测的方法。更具体的说，是利用微波处理去除大蒜中的205种农药残留的气相色谱/质谱联用法(GC/MS)。

背景技术：

大蒜在种植过程中，地下害虫危害严重，使得菜农大量使用高毒农药，对大蒜造成严重污染。农药超标现象严重。在蔬菜农药残留检测中，洋葱、大蒜和韭菜等含硫蔬菜是一类较为特殊的复杂样品。这类蔬菜在样品制备过程中被搅碎时，其中的活性酶会使蔬菜中的硫化物释放，产生特殊气味。这些硫化物不易除去，在气相色谱电子捕获检测器(GC/ECD)、气相色谱火焰光度检测器(GC/FPD)和气相色谱质谱检测器(GC/MS)上会产生很强的响应，影响待测物的定性与定量。因此解决样品中硫化物的干扰是气相色谱法测定含硫蔬菜中农药残留的关键。

大蒜里一般含有大蒜素，在新鲜的大蒜中大蒜素是以大蒜氨酸的形式存在的，当大蒜受到冲击时，大蒜酶接触到空气中的氧被活化，大蒜氨酸发生酶促反应转化成大蒜素，由于大蒜素与某些农药的结构和性质相似，因此在进行农药多残留分析时会产生强烈的干扰，因此蒜氨酸酶的失活是消除这类干扰的关键。

一般常用微波处理和磷酸处理，微波和磷酸的作用是使含硫蔬菜中活性酶失活，这样在切碎时，就不会产生硫化物，大大减少了测定干扰。此外，还有采用硝酸银分散到氧化铝和氟罗里硅土上去除蔬菜中硫化物的报道，但硝酸银对含硫农药有很强的吸附，使回收率不能达到要求。用高锰酸钾-硫酸氧化法也可去除蔬菜中的硫化物，但不适用于性质不稳定的有机磷类农药。但采用加硫酸铜匀浆方法测定油菜、油菜籽和甜菜样品时，对除去硫化物也有很好的效果。

发明内容：

本发明选择了微波处理作为大蒜的前处理手段，并对微波处理时间对农药稳定性的影响进行了试验。将整瓣大蒜直接微波处理，在大蒜素产生之前，使大蒜样品中的酶失活，也就不会产生大蒜素，从而达到去除硫化物的干扰，又使待测分析物回收率达到要求。为实现上述目的，本发明提供如下的技术方案：

大蒜样品中农药多残留测定的前处理方法，其特征在于按如下的步骤进行：

(1)大蒜去皮，整瓣称100-200g用500W微波加热90-120秒，样品匀浆处理；

(2)精确称取样品10g(精确到0.1g)加入40-60mL乙腈和10-20mL水，以20000-30000转/min匀浆搅拌2-5min；5mL乙腈洗刀头，抽滤，15-30mL乙腈分三次清洗残渣，添加水1-5mL后，待净化；

(3)用10-20mL乙腈和10-30mL纯水分别预淋C18柱(1000mg代表柱子规格)，将上述滤液过PSA柱净化，直接将上述提取液过柱，不需要淋洗液(其中的PSA是一种固相萃取柱通用名称，具体填料为N-丙基乙二胺的固相萃取柱，C18为填料是三宫能十八烷基的固相萃取柱)，用9-15mL乙腈，3-5mL水洗残液；

(4)洗脱液，加5mL食盐饱和的2mol/L磷酸缓冲溶液和6-10g食盐，振荡3-5min，静止10-15min；

(5)取上层溶液，在38℃下减压浓缩；将浓缩液进行第2次净化，用洗脱液A 5mL预淋，PSA柱(500mg代表柱子规格)，然后用30mL洗脱液B洗脱，再用30mL洗脱液A洗脱，收集洗脱液；其中洗脱液A：丙酮+正己烷(50mL+50mL)；洗脱液B：丙酮+正己烷(20mL+80mL)。

(6)洗脱液中加入正十烷50μL，在38℃下减压浓缩近干，用氮吹仪吹干，2mL定容液{丙酮+正己烷(50mL+50mL)}定容，收集于样品小瓶内，供GC/MS测定。

本发明大蒜样品中农药多残留测定的前处理方法的具体步骤如下：

1、试验材料和仪器设备

试剂：除另有规定外，试剂均为分析纯，水为蒸馏水乙腈、丙酮(色谱纯)、正己烷(色谱纯)；洗脱液A：丙酮+正己烷(50+50)、洗脱液B：丙酮+正己烷(20+80)、定容液：丙酮+正己烷(50+50)；氯化钠；正十烷；预处理小柱：C18柱(500mg，3mL)、PSA柱；食盐饱和的2mol/L磷酸缓冲溶液(pH＝7.5)；农药标准品(纯度均≥95％，购自德国Dr.Ehrenstorfer公司)；农药标准品储备溶液：200mg/L；工作标准溶液：A：1000μg/L；B：500μg/L；C：50μg/L。