[发明专利]一种白腐真菌的原生质体制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程中微生物育种的方法，特别涉及一种白腐真菌的原生质体制备方法。

背景技术

木质素是植物细胞壁主要成分，畜禽消化道内几乎没有降解木质素的酶，食草动物靠消化道寄生的微生物能够部分降解木质素，但单胃动物不具有这种能力。木质素是动物消化植物性饲料的最大障碍，微生物发酵是克服这一难题的最理想方法。选育木质素降解率高，且在饲料上易于发酵的微生物菌株，是养殖业实现″节粮″的关键技术。白腐真菌是降解木质素最有效的微生物，也是经常用于木质素降解研究的模式菌株。但在自然状态下，由于白腐真菌的定植缓慢，很难形成优势种群，其要求的发酵条件较严格，为了选育出更高木质素降解力的变异菌株，加强木质素的降解，需对它的原生质体的制备方法进行研究。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种白腐真菌的原生质体的制备方法，使其原生质体的制备率达到5-8×10⁶个/mL。

本发明的技术方案是：

一种白腐真菌的原生质体的制备方法，其特征在于：接PDA固体培养基上健壮菌丝体于液体培养基中培养240-290h，用0.1％-0.3％β-巯基乙醇预处理菌丝体，采用溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶的混合酶：在26-32℃酶解1-4h，酶液pH4-7，用0.6mol/L MgSO₄做渗透压稳定剂时，原生质体数量达到5-8×10⁶个/mL。

所述的白腐真菌的原生质体的制备方法，最佳工艺参数是：

接PDA固体培养基上健壮菌丝体于液体培养基中培养264h，用0.1％β-巯基乙醇预处理菌丝体，采用混合酶-溶菌酶∶纤维素酶∶蜗牛酶的最佳浓度比为2∶2∶1，酶液pH5，在30℃酶解3h；用0.6mol/L MgSO₄做渗透压稳定剂时，原生质体数量达到8×10⁶个/mL。

本发明效果是：

本白腐真菌的原生质体制备方法，

1.制备工艺简单，易操作。

2.原生质体的制备率达到5-8×10⁶个/mL。

具体实施方式

一种白腐真菌的原生质体制备方法提供了适合制备高白腐真菌原生质体数量的方法。

实例一：

接PDA固体培养基上健壮菌丝体于液体培养基中培养240h，用0.1％β-巯基乙醇预处理菌丝体，采用混合酶(溶菌酶∶纤维素酶∶蜗牛酶的最佳浓度比为2∶2∶1；酶液pH4)在28℃酶解3h；用0.6mol/L MgSO₄做渗透压稳定剂时，原生质体数量达到6×10⁶个/mL。

实例二：

接PDA固体培养基上健壮菌丝体于液体培养基中培养288h，用0.3％β-巯基乙醇预处理菌丝体，采用混合酶(溶菌酶∶纤维素酶∶蜗牛酶的最佳浓度比为2∶2∶1；酶液pH5，)；在32℃酶解3h；用0.6mol/L MgSO₄做渗透压稳定剂时，原生质体数量达到7.2×10⁶个/mL。

实例三：

接PDA固体培养基上健壮菌丝体于液体培养基中培养264h，用0.1％β-巯基乙醇预处理菌丝体，采用混合酶(溶菌酶∶纤维素酶∶蜗牛酶的最佳浓度比为2∶2∶1；酶液pH6)；在30℃酶解3h；用0.6mol/L MgSO₄做渗透压稳定剂时，原生质体数量达到8×10⁶个/mL。