[发明专利]一种酪蛋白快速检测卡及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种酪蛋白快速检测卡及其检测方法，是一种检测酪蛋白的检 测器具，属于奶制品检测技术领域。

背景技术

牛奶是人们日常生活重要的食品，牛奶营养丰富，是人类重要的食品，其 主要成份有：每100克牛奶含水分87克、蛋白质3.3克、脂肪4克、碳水化合 物5克、钙120毫克、磷93毫克、铁0.2毫克、维生素A 140国际单位、维生 素B₁0.04毫克、维生素B₂0.13毫克、尼克酸0.2毫克、维生素C1毫克。而牛 奶蛋白质更是牛奶中的关键营养成分，鲜牛奶包装上都会标明蛋白质含量。正 常情况下，牛乳所含有的蛋白总量大约为3.3％，其中2.5％左右是酪蛋白，0.6％ 是乳清蛋白。酪蛋白是一类磷酸蛋白，占牛乳真蛋白的80％左右。

收购生鲜牛奶、生产过程中、产品出厂时和市场上，都需检测蛋白质的含 量，以判定牛奶的质量。根据蛋白质的化学性质，有几种蛋白检测方法。食品 工业上普遍采用的被定为国家标准的是凯氏定氮法。这是19世纪后期丹麦人约 翰·凯达尔发明的方法，原理很简单：蛋白质含有氮元素，用强酸处理样品，让 蛋白质中的氮元素释放出来，测定氮的含量，就可以算出蛋白质的含量。牛奶 蛋白质的含氮率约16％，根据国家标准，把测出的氮含量乘以6.38，就是蛋白 质含量。

但凯氏定氮法实际上测的不是蛋白质含量，而是通过测氮含量来间接推算 蛋白质的含量，如果样品中还有其他化合物含有氮，这个方法的准确性就存在 问题。在通常情况下，牛奶中的主要成分只有蛋白质含有氮，其他主要成分(碳 水化合物、脂肪)都不含氮，因此凯氏定氮法是一种很准确的测定蛋白质含量 的方法。但是如果有人往样品中添加含氮的其他物质，通过凯氏定氮法将错误， 就获得虚假的蛋白质含量。

为此，本发明拟发明一种基于蛋白质抗原性的免疫学检测方法，采取免疫 学竞争法的原理，结合胶体金标记技术和免疫层析法设计的一种快速检测试剂， 可快速特异地检测牛奶样品中的酪蛋白。根据检测卡样品测试线(T)和对照线(C) 的有无来判定牛奶样品中的酪蛋白含量。反应是利用牛奶蛋白抗原性而建立的 一种蛋白检测方法，具有特异性强的优点，可避免其它检测方法的假阳性导致 的误检问题。同时检测卡操作简单快速，无需特殊的仪器设备，既可以在实验 室进行，也可在超市、家庭、车间等实地进行测定。由于样本量需要少、简便 快速，适用于大量样本的筛查。结果准确，液态奶样品灵敏度为2500ppm，准 确率大于95％。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能检测酪蛋白的检测器具，直接应用免疫学的 方法直接检测液态奶、奶粉和奶制品样品酪蛋白的含量，克服现有凯氏定氮法 非特异性检测的缺陷，建立基于免疫学特异性的检测方法。

本发明的技术方案：一种酪蛋白快速检测卡，其为在长条扁平薄壳状的检 测卡外壳1中设置测试条2，检测卡外壳表面有检测窗孔3和加样孔4；测试条 2是由支承背板5上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫8、胶体金膜7、硝酸纤 维素膜6、和吸水膜9所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜6，支承背 板一端叠置粘贴吸水膜9，另一端叠置粘贴样品垫8，吸水膜内端与样品垫内端 各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间 夹置粘贴一段胶体金膜7；胶体金膜为含抗酪蛋白抗体胶体金标记的玻璃纤维 膜，硝酸纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，依次是：含酪蛋白的检测带 10，含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带11，测试条置入检测卡外壳内，样品垫正 对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。

采用上述酪蛋白快速检测卡，检测样品可以是液态奶、奶粉和奶制品等样 品。

样品的处理方法是：

针对液态奶样品的处理方法是：液态奶用样品稀释液进行10倍稀释后用于 检测。

针对奶粉样品的处理方法是：称取1克奶粉样品，加入9mL样品稀释液， 在试管中搅拌均匀，再用样品稀释液进行10倍稀释后用于检测。

针对奶制品样品的处理方法是：取1g捣碎后的奶制品样品，加入9mL样品 稀释液，在试管中搅拌均匀，再用样品稀释液进行10倍稀释后用于检测。

所用样品稀释液为pH 7.6、10mmol PBST溶液。

当检测带10和质控带11同时显现棕红色印迹带，检测结果为阳性，表示 被检测样品中酪蛋白含量低于正常值；