[发明专利]具有多脏器转移潜能的中国人肺腺癌细胞株

说明书

技术领域

本发明属生物技术、微生物动物细胞系领域，具体涉及一种具有多脏器转移高 潜能的中国人肺腺癌细胞株及其用途。

背景技术

肺癌是严重威胁人类生存和发展的恶性疾病之一，已成为肿瘤疾病中的头号杀 手。虽然目前对肺癌的治疗已经取得长足的进展，但是肺癌死亡率仍长期居高不下， 主要原因在于难以早期诊断和它的高转移性，许多患者首诊时即发现有多器官转移。 所以，转移和复发仍旧是肺癌治疗的难题。然而，肺癌转移尤其是靶向转移(肿瘤 细胞向特定器官进行转移)的分子机理还不清楚。肺腺癌的发病率呈逐年上升趋势， 而且非常容易发生骨、脑、肝脏的转移，病人的预后很差。肿瘤转移相关分子的研 究一直在开展，也发现了各种各样的分子如降解细胞基质的分子，细胞黏附分子， 转移相关糖蛋白等等，但都没有对肿瘤向特定器官进行转移的机制进行说明。本专 利立足于开发具有自主知识产权的中国人多器官转移的专利细胞系，旨在通过分离 纯化出来的向特定器官进行转移的骨转移、脑转移、肝脏等多脏器转移细胞系进行 系统地全基因组芯片和microRNA芯片分析，将基因或microRNA的表达变化与基因 组的扩增或缺失相联系，并结合microRNA的靶标数据库(miRBase)，筛选那些有位 于基因组上缺失或扩增区域的同时有表达变化的microRNA，将这些microRNA的调 控靶标(即受这些microRNA调控的基因)与在各转移细胞中表达发生变化的且位于 基因组缺失或扩增区域的基因进行比较，挑选那些重叠的基因进行研究，这样有利 于发现关键的或起决定作用的与靶向转移相关的基因或microRNA，可以深入揭示肺 腺癌靶向转移的分子机理，为阻断转移提供候选的分子靶标，可服务于肺腺癌病人 的检测，评估其发生转移以及转移部位的风险，从而为有针对性地治疗提供依据， 分子靶标功能的明确也为今后分子靶向治疗奠定基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有多脏器转移高潜能的中国人肺腺癌细胞株，所 述的细胞株具有骨、脑、肝、肺、肾和肾上腺多脏器转移潜能。

本发明的进一步目的是提供该肺癌细胞株的医疗研究用途。

本发明采用取自56岁女性肺腺癌患者十次化疗后产生的腹水作细胞原代培养 的材料，经细胞培养技术培养成功，建立的肺腺癌细胞株命名为CPA-Y2。经裸鼠 动物实验证实，第八代细胞开始致瘤率，第十代细胞致瘤率已达到100％；体外培养 细胞在显微镜下显示为贴壁生长且细胞面积较小(与SPC-A-1比较)；经裸鼠左心室 种植(75-80万细胞/只)三周后陆续出现小鼠下肢不便，后经核素骨显像检测和 病理确定为骨、肺、肾上腺转移达100％；同时有80％肾转移、75％肝转移、50％ 脑转移。(The Chinese Lung Adenocarcinoma cell with Highly Bone，Pulmonary，Brain，Liver，adrenal and kidney Metastases，CPA-Y2)。已于2008 年10月8日保藏，保藏单位：CGMCC，北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物 研究所，保藏编号：CGMCC No 2708，分类命名：中国人肺腺癌细胞系。

本细胞株具有以下生物学特性：

1，亲代细胞的体积较小(和SPC-A-1肺腺癌细胞比)。

2，致瘤率在裸鼠皮下注射100万癌细胞，第八代50％致瘤；第十代起100％。

3，具有骨、脑、肝、肺、肾和肾上腺多脏器转移的中国人肺腺癌细胞系。

4，第一代肺转移细胞经左心室注射裸鼠形成多脏器转移的时间为2-3周。

5，亲代细胞转移部位出现的比率，以肺、骨、肾上腺为突出。

6，荧光定量PCR测定，癌转移相关基因IGF、ETV5高表达。

7，患者十次化疗后产生大量胸、腹水提示该细胞对化疗耐药。

表1是细胞生物特性表。

表1

注：皮下滞瘤率系指每只裸鼠皮下注射百万细胞后统计。

本发明建立了一个具有多脏器高潜能转移的国人肺腺癌亲代细胞株。

本发明通过下述方法建立具有多脏器高潜能转移的国人肺腺癌亲代细胞株，