[发明专利]一种吴茱萸的组织培养法

说明书

技术领域

本发明涉及一种吴茱萸组织培养的方法。

背景技术

吴茱萸为芸香科吴茱萸属其中的一个种，果实入药，性热，味辛、苦，具有散寒止痛， 降逆止呕，助阳止泻等功效，用于治疗头痛、疝痛、脚气、痛经、脘腹胀痛、呕吐吞酸、 口疮等，药用价值很高；生于温暖地带山地、路旁或疏林下，其分布于广东、广西、贵州、 云南、四川、陕西、湖南、湖北、福建、浙江、江西等地。

吴茱萸花单性，雌雄异株，苗期雌雄株不易分辨且不同株系果实有效成分含量差异大， 造成生产上品种混杂严重，单位面积果实产量低；而传统的种子或插条育苗方式，繁殖系 数低，分别仅为40-55％(而雄株率高达50％)和10％左右；严重影响到优良品种的大规 模应用和药材品质的一致性和稳定性。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种吴茱萸的组织培养方法，采用该方法能获得大量 的吴茱萸的种苗。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种吴茱萸组织培养的方法，依次包括以下步骤：

1)、取无病斑、生长健壮的吴茱萸嫩芽进行流水冲洗；

2)、将上述流水冲洗后的嫩芽经常规消毒，然后切成0.5～1.0cm长的小段嫩芽I，将 上述小段嫩芽I接种到诱导不定芽培养基上进行培养；培养条件为：16小时光照，光照强 度30～40μmol m^-2.s^-1，温度为26～28℃；8小时暗培养，温度为20～22℃；上述光照和暗 培养交替进行；

3)、待小段嫩芽I上长出的不定芽长至2.0～3.0cm高的小苗I时，割取小苗I；将此 小苗I切成0.5～1.2cm长的茎段I，将上述茎段I接种到增殖培养基上进行培养；培养条 件为：16小时光照，光照强度30～40μmol m^-2.s^-1，温度为26～28℃；8小时暗培养，温度 为20～22℃；上述光照和暗培养交替进行；

4)、待茎段I上长出的不定芽长至2.0～5.0cm高的小苗时II，割取小苗II；将此小苗 II切成0.8～1.2cm长的茎段II，将上述茎段II接种到增殖培养基上进行培养；培养条件为： 16小时光照，光照强度30～40μmol m^-2.s^-1，温度为26～28℃；8小时暗培养，温度为20～ 22℃；上述光照和暗培养交替进行；

5)、待茎段II上长出的不定芽长至3.0～5.0cm高的小苗III时，割取小苗III；将此小苗 III接种到生根培养基中；

6)、待上述小苗III长出大于2cm的至少3条根时，得可出瓶种植的种苗。

作为本发明的吴茱萸的组织培养法的改进：步骤2)中的诱导不定芽培养基为：MS基 本培养基+BA 0.5～1.0mg/l+IBA 0.1～0.5mg/l+糖20～30g/l+琼脂5～9g/l，pH为5.5～6.0。

诱导不定芽培养基的制作方法具体如下：以MS基本培养基作为基础，分别加入6-苄基 腺嘌呤(BA)、乙哚丁酸(IBA)、糖和琼脂，均匀混合，利用1mol/L的KOH或1mol/L的HCl 调节pH为5.5～6.0；每1L的MS基本培养基中加0.5～1.0mg BA、0.1～0.5mg IBA、20～30g糖 和5～9g琼脂。

作为本发明的吴茱萸的组织培养法的进一步改进：步骤3)和步骤4)中的增殖培养基 均为：MS基本培养基+BA 0.3～1.0mg/l+IBA 0.1～0.3mg/l+糖20～30g/l+琼脂5～9g/l，pH 为5.5～6.0。

增殖培养基的制作方法具体如下：以MS基本培养基作为基础，分别加入6-苄基腺嘌呤 (BA)和乙哚丁酸(IBA)、糖和琼脂，均匀混合，利用1mol/L的KOH或1mol/L的HCl调节 pH为5.5～6.0；每1L的MS基本培养基加0.3～1.0mg BA、0.1～0.3mg IBA、20～30g糖和5～9g 琼脂。

作为本发明的吴茱萸的组织培养法的进一步改进：步骤5)中的生根培养基为：1/2MS 基本培养基+NAA 0.2～0.5mg/l+糖30g/l+琼脂5～9g/l，pH为5.5～6.0。