[发明专利]基于人TMPD1和HMGB1 A box的重组融合蛋白及其制备方法

权利要求书

1.一种基于人TMPD1和HMGB1 A box的重组融合蛋白，其特征在于具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的基于人TMPD1和HMGB1 A box的重组融合蛋白，其特征在于其具有SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

3.权利要求1所述的基于人TMPD1和HMGB1 A box的重组融合蛋白的制备方法，其特征在于包含以下步骤：

1)提取人外周血单核细胞的总RNA并将其反转录为cDNA；

2)以步骤1)中的cDNA为模板，使用SEQ ID NO：3-4所示的核苷酸序列为引物扩增人TMPD1的cDNA；

3)以步骤1)中的cDNA为模板，使用SEQ ID NO：5-6所示的核苷酸序列为引物扩增人HMGB1 A box的cDNA；

4)将步骤2)获得的人TMPD1的cDNA和步骤3)获得的人HMGB1 A box的cDNA分别酶切后与载体连接；

5)将步骤4)所得连接产物转化于大肠杆菌，筛选阳性克隆，得到包含人HMGB1 A box/限制性内切酶位点/TMPD1的重组载体；

6)用步骤5)重组载体为模板，以SEQ ID NO：7-8所示的核苷酸为引物进行反向PCR，在缺失限制性内切酶位点编码序列的同时，将人HMGB1 A box与TMPD1的编码序列直接相连；

7)将步骤6)获得的人HMGB1 A box与TMPD1直接相连的PCR产物转化于大肠杆菌，诱导表达获得由人HMGB1 A box与TMPD1融合到一起的重组蛋白。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于步骤4)中使用KpnI和EcoRI酶切步骤2)获得的人TMPD1的cDNA。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于步骤4)中使用EcoRI和HindIII酶切步骤2)获得的人HMGB1 A box的cDNA。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于步骤5)中的限制性内切酶位点为EcoR I。

7.权利要求1所述的基于人TMPD1和HMGB1 A box的重组融合蛋白在制备抗炎药物中的应用。