[发明专利]以灵芝子实体为原料提取灵芝三萜与灵芝多糖的方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种以灵芝子实体为原料提取灵芝三萜与灵芝多糖的方法。

(二)背景技术

灵芝(Ganoderma lucidum)是我国传统的名贵中药材和药用真菌，其主要功效成分为灵芝三萜和灵芝多糖。其中灵芝多糖的功能主要在于抗肿瘤、调节免疫、抗氧自由基、活血化瘀作用和抗衰老，而灵芝三萜则具有护肝排毒、抗氧化、抗菌抗炎、抗HIV病毒、镇痛、抑制血管紧张素转化酶、抑制胆固醇合成、降低血小板聚集、抑制组胺释放、抑制肝脏肿瘤细胞等作用。

目前，一般采用有机溶剂法提取灵芝三萜，通常需要较长的提取时间并消耗大量的提取溶剂，同时大量有机溶剂的使用会给人体和环境带来不利的影响。传统的灵芝多糖提取方法主要是采用热水浸提法、酸浸提法、碱浸提法提取。酸或碱浸提法虽能提高提取率，但对设备要求高且极易破坏多糖的结构，还存在环境污染问题。另外由于灵芝子实体由纤维素、半纤维素和木质素等主要成分构成，结构紧密，活性多糖有效成分附着在细胞壁内侧，传统的热水浸提法时间长、耗能高，活性成分提取物得率低。中国专利CN1181271介绍了使用低压水煮工艺，多糖的药理活性比常规水煮要高，但多糖提取率偏低，且所得提取物中灵芝三萜酸含量也偏低。中国专利CN1560072通过采用超临界CO₂萃取灵芝三萜酸提取液，提余物再经热水浸提得灵芝多糖提取液。但该方法所需设备投入较大、操作难度和生产成本也较高，且灵芝多糖提取率和多糖含量偏低。

(三)发明内容

本发明的目的是，提供一种应用超声波、酶提等高新技术优化灵芝生物活性成分(灵芝多糖和灵芝三萜)的提取工艺，提高名贵药用菌灵芝的综合利用率和附加值，降低资源消耗和生产成本，减少提取设备投入。

本发明采用的技术方案是：

一种以灵芝子实体为原料提取灵芝三萜与灵芝多糖的方法，所述方法包括：(1)取干燥灵芝子实体粉碎得到干粉，在超声频率15～100KHz、40～90℃条件下以50～100％乙醇(乙醇体积浓度50～100％的乙醇水溶液，100％乙醇即为无水乙醇)为溶剂提取10min～90min，过滤，滤液干燥得到灵芝三萜提取物，滤渣用于灵芝多糖的提取；(2)步骤(1)滤渣在35～70℃、pH3.5～7.0条件下，加入适量水在复合酶作用下酶解水提0.5h～4h，灭酶、分离得到上清液，浓缩至体积为上清液体积的1/2～1/6得到浓缩液，再加入浓缩液体积的2～5倍量的75～100％乙醇进行醇沉，分离、干燥得到灵芝多糖提取物；所述复合酶为下列两种以上的混合物：①4800～80000U/g干粉的木瓜蛋白酶、②90～1500U/g干粉的纤维素酶、③32～200U/g干粉的果胶酶。所用酶均可采用市购商品酶，通常纤维素酶单位酶活为10000U/g～20000U/g，木瓜蛋白酶单位酶活为700000U/g～800000U/g，果胶酶单位酶活为15000U/g～25000U/g，复合酶用量约为灵芝干粉质量的0.1～20％。

步骤(1)中50～100％乙醇用量为5～50mL/g干粉。

步骤(2)中酶解水提时水用量为10～100mL/g干粉。

步骤(2)中以1.0mol/LNaOH或1.0mol/L HCl调节溶液的pH值。

优选的，步骤(2)中复合酶为9600～80000U/g干粉的木瓜蛋白酶和180～1500U/g干粉的纤维素酶的混合物。

优选的，步骤(2)中复合酶为4800～12800U/g干粉的木瓜蛋白酶、90～240U/g干粉的纤维素酶和32～200U/g干粉的果胶酶的混合物。

具体的，所述方法如下：

(1)取干燥灵芝子实体粉碎得到干粉，在超声频率15～100KHz、40～90℃条件下，加入5～50mL/g干粉的50～100％乙醇为溶剂提取10min～90min，过滤，滤液喷雾干燥得到灵芝三萜提取物，滤渣用于灵芝多糖的提取；

(2)步骤(1)滤渣在35～70℃、pH3.5～7.0条件下，加入10～100mL/g干粉的蒸馏水，在复合酶作用下酶解0.5h～4h，灭酶，离心取上清液浓缩至体积为上清液体积的1/6～1/2，浓缩液加入体积为浓缩液体积3倍的95％乙醇，搅拌、静置12h～24h，离心取沉淀喷雾干燥得到灵芝多糖提取物；

本发明的内容涉及一种利用超声波-醇提、复合酶-水提集成技术从灵芝子实体中高效提取灵芝三萜与灵芝多糖的方法。其特点是：将灵芝子实体粉碎，先采取超声波辅助醇提(超声波-醇提)提取灵芝三萜后，再以复合酶辅助水提醇沉(复合酶-水提)制备灵芝多糖，分别经喷雾干燥得到灵芝三萜提取物和灵芝多糖提取物。