[发明专利]高温放线糖莱斯菌RHA1菌株产α-淀粉酶及其纯化方法

说明书

技术领域：

本发明属应用微生物领域，具体地，涉及高温放线糖莱斯菌(Laceyellasacchari)RHA1菌株，以及从中获得的耐热性α-淀粉酶及其纯化方法。

背景技术：

α-淀粉酶，也称液化型淀粉酶，它能水解淀粉多糖分子中β-1，4-糖苷键，产生单糖和寡糖。它一直被用于多个领域，例如，在发酵液中被用于谷物和马铃薯的糖化，在纺织业中用作淀粉糊去除剂，在制药业中用作助消化药，而在食品业中用于制造粘稠的麦芽糖浆。

由于淀粉酶在液化、糖化过程中一般要在高温下使淀粉糊化，因此，淀粉的转化需要热稳定的淀粉酶(heat-stable amylase)。耐热性α-淀粉酶具有良好的热稳定性，在工业生产中有着广泛的应用前景。

目前已从中温型微生物和耐热型微生物中分离出了很多种热稳定的淀粉酶.不同来源的α-淀粉酶具有多方面不同性质，从而导致各具特色的应用范围，因而需要持续不断开发新特性α-淀粉酶以更好满足工业需求。现有技术中未有高温放线菌RHA1菌株，以及从中获得的耐热性α-淀粉酶及其纯化方法的报道。

发明内容：

本发明旨在提供一种能高效产生耐热性α-淀粉酶的高温放线糖莱斯菌RHA1菌株。

本发明的另一目的在于提供一种从高温放线糖莱斯菌RHA1菌株中获得的α-淀粉酶及其纯化方法。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下技术方案：

高温放线糖莱斯菌(Laceyella sacchari)RHA1菌株，保藏号为：CGMCCNo.2639，其具有产生α-淀粉酶的能力。

所述的高温放线糖莱斯菌RHA1菌株，菌株菌落形态为白色透明，有褶皱，表面干燥，且正反颜色不同，球状、革兰氏阳性菌，无鞭毛，无菌毛，在液体培养时产生大量的菌丝体。

从高温放线糖莱斯菌RHA1菌株中获得的α-淀粉酶。

所述的α-淀粉酶，其酶学性质为：最适反应温度为37℃，在28℃-85℃较宽范围内有较高催化活性；最适pH为6，在pH5.0-9.0下，有较高酶活；淀粉酶的分子量为11.9649KDa，为一单体蛋白。

从高温放线糖莱斯菌RHA1菌株中获得的α-淀粉酶的纯化方法，包括：

(1)超滤浓缩：高温放线糖莱斯菌(Laceyella sacchari)RHA1菌株的发酵培养条件为温度50℃，PH7.5，培养时间16-18小时，将发酵液离心，取上清液，利用10KDa的超滤膜包进行超滤浓缩；

(2)硫酸铵沉淀：浓缩后液体加硫酸铵至40％的饱和度，离心取上清，继续加硫酸铵至60％的饱和度，离心弃上清，沉淀最后用PH7.0的磷酸盐缓冲液溶解，制成粗酶液；

(3)Superdex 7510/300凝胶过滤层析：将获得的粗酶液离心，上清进行浓缩，上样于用50mM，PH7.0的磷酸盐缓冲液预平衡过的Superdex 75 10/300凝胶过滤层析柱，洗脱，收集酶活性部分，即为α-淀粉酶纯酶。

本发明高温放线糖莱斯菌(Laceyella sacchari)RHA1菌株已经于2008年8月26日在北京中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为：CGMCC No.2639。